La paratuberculosis (PTB) o Enfermedad de Johne (EJ), es una enfermedad crónica infecciosa que ocasiona una enteritis granulomatosa en los rumiantes y eventualmente otras especies, con una amplia distribución mundial; causada por el Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) (Coelho et al., 2010). Clasificada por la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) como una enfermedad transmisible, con impacto socioeconómico y en la salud pública, sugiriéndose la participación de MAP en la enfermedad de Crohn en humanos (OIE, 2017; Balseiro et al., 2019;Gioffré et al., 2015). Del MAP se han descrito tres diferentes cepas la tipo I (Sheep), la tipo II (Cattle) y la tipo III (Bisón o intermedia), de acuerdo a su preferencia por infectar diferentes especies de rumiantes y sus distintos requerimientos para su aislamiento bacteriano (Begg y Whittington, 2010; Windsor, 2015). La enfermedad se caracteriza por presentar signos de emaciación progresiva, edema submandibular y eventualmente la muerte de los animales. La principal vía de infección es la fecal-oral, con un periodo de incubación que oscila de uno a cuatro años, por lo que pueden llegar a observarse signos de la enfermedad a partir del año de vida (Chávez et al., 2004), una vez que MAP ingresa al intestino se aloja en los macrófagos constituyendo una infección granulomatosa donde se pueden observar cantidades variables de bacterias (Begg y Whittington, 2010; Windsor, 2015). El diagnóstico, prevalencia e impacto de la enfermedad son escasos y no concluyentes tanto en América Latina como en México (Chávez et al., 2004; Begg y Whittington, 2010; Fernández et al., 2014).

En México, se ha detectado la presencia de PTB en ovinos en diversos estados del país, como son, San Luis Potosí, Guanajuato, Querétaro, Ciudad de México, Estado de México y Veracruz (Estévez et al., 2006). Particularmente, en el Estado de Aguascalientes, la actividad de la ovinocultura como en otros estados del país ha crecido a partir de 1990 en más del 100%, con una producción cárnica de aproximadamente 612 toneladas en el 2018, siendo la zona Valle, conformado por los municipios de Aguascalientes, San Francisco de los Romo, Rincón de Romos, Jesús María, Pabellón de Arteaga y Asientos, en donde se concentra el 85% de la producción de carne ovina del Estado y de la actividad pecuaria en general (SIAP, 2018).

Es de suma importancia resaltar que en esta región no se cuenta con registros del diagnóstico e identificación de las enfermedades que son capaces de afectar a los rebaños ovinos y el efecto adverso que éstas pueden causar en la productividad. Pues en el Estado de Aguascalientes existen casos no cuantificados de animales adultos con emaciación progresiva y mortalidad, sin embargo, no se realiza un diagnóstico y es imposible determinar si esta la PTB.

Por lo anterior, el objetivo del presente trabajo es identificar la presencia de MAP a través de estudios anatomopatológicos, cultivo y PCR en ovinos con cuadro clínico sugerente a PTB, así como determinar la seroprevalencia contra MAP mediante ELISA en rebaños ovinos del Valle de Aguascalientes.

Seroprevalencia. El porcentaje de seroprevalencia promedio de los 16 rebaños, fue de 51.3%, con un valor mínimo de 4.8% y un valor máximo de 91.33% con un intervalo de confianza al 95.0% para la media de: [32.7173, 62.3415]. Los resultados de seroprevalencia individual para cada uno de rebaños se describen la Tabla 1. En los dieciséis rebaños en los que se realizaron las pruebas de ELISA (PPA-3), se identificaron casos positivos, obteniéndose una seroprevalencia calculada a “nivel de rebaño” del 100% (Tabla 1).

Estudio anatomopatológico. En los 9 animales a los que se les realizó la necropsia, presentaron emaciación, lana o pelo hirsutos, edema submandibular (Figura 1), presencia de ascitis, degeneración de la grasa, así como engrosamiento aparente de la mucosa intestinal a nivel de íleon y yeyuno (Figura 2), además de aumento de tamaño de linfonodos mesentéricos y fusión de éstos, no encontrándose evidencia de alteraciones o lesiones sugerentes a otra etiología diferencial a las caudas por PTB. A través del estudio histopatológico, se logró observar en 8 de los 9 animales estudiados (88.8%), la presencia de enteritis, linfadenitis granulomatosas con presencia de macrófagos, células gigantes y presencia de incontables Bacterias Acido-Alcohol Resitentes (BAAR) mediante la tinción de Ziehl-Neelsen (ZN). Determinándose como lesiones de tipo multibacilar (Figura 3). Mientras que en 1 de los 9 animales estudiados (11.2%) se observó la presencia de lesiones granulomatosas de tipo multifocal con escasa cantidad de bacilos (BAAR) en el interior de macrófagos, coincidente con una lesión tipo paucibacilar.

Figura 2

Figura 3

Aislamiento bacteriano. Después de 12 semanas de incubación se observaron en 5 casos (55.5%), desarrollo de colonias de color amarillo, cremosas, convexas y de forma circular característicos de MAP en los medios L-Jm adicionados con micobactina. Mientras que en 4 de los casos (44.5%), no se observó desarrollo de colonias hasta la semana 40. Todos los medios que no fueron adicionados con micobactina, no presentaron crecimiento.

PCR IS900. A partir de los cinco aislamientos bacterianos obtenidos se obtuvieron productos de amplificación de la secuencia IS900 correspondiente a 310 pares de bases (pb), confirmándose así la presencia MAP a partir de estos aislamientos obtenidos (Figura 4).

Figura 4

Es así como en el 100% de la muestra (16 rebaños de estudio) se obtuvo seropositividad a MAP; a su vez en el 31.25% de la muestra (5 rebaños) se confirmó la presencia de MAP por aislamiento bacteriano e identificación por PCR IS900 a partir de los animales que presentaron cuadro clínico al momento del estudio (Tabla 2).

Tabla 2

Seropositividad a MAP	Animales con signos y lesiones a la necropsia sugerentes a PTB	Aislamiento Bacteriano a partir de lesiones en Intestino delgado y PCR IS900 positivo
16/16	9/16	5/16
100%	56.25%	31.25%

La seroprevalencia media obtenida en el presente estudio (51.3%) reporta ser elevada, en comparación a otros estudios realizados de medición de prevalencia tanto en el país como a nivel mundial, considerando que la enfermedad internacionalmente presenta una elevada prevalencia en diferentes especies de rumiantes, con un 20% y hasta un 40% (Whittington et al., 2019). En México, diversos estudios indican evidencias serológicas ante MAP como los reportados por Jaimes et al., (2008) en San Luis Potosí, México; donde los resultados de seroprevalencia en ovinos por el método de inmunodifusión en Agar-gel fue de un 44%. Mientras que en el estado Nayarit se reportó un 28.94% en ovinos, a través de pruebas de ELISA (Mejía et al., 2015). En Latinoamérica, escasos trabajos realizados en ovinos muestran una amplia variabilidad en la prevalencia a MAP, donde se reportan prevalencias desde un 4.3% promedio en ovinos (Fernández et al., 2014), hasta un 54.08 % de seroprevalencias a MAP en ovinos en Brasil, (Medeiros et al., 2012).

Ante los escasos estudios, y una amplia variación en cuanto a la metodología y la prueba diagnóstica empleada para la evaluación de la prevalencia a la PTB, Espechit et al. (2017) yWhittington et al., (2019) señalan que esto resulta en una gran variabilidad de los resultados, y por consecuencia, una desestimación de la presencia e impacto verdadero de la paratuberculosis.

A pesar de los resultados obtenidos de una elevada frecuencia, al momento del estudio sólo se encontraron casos clínicos (9/16) en el 56.25% de los rebaños estudiados, donde la totalidad de ellos muestran lesiones histopatológicas multibacilares o paucibacilares, características de la enfermedad, en donde si se considera que éstas se presentan en individuos mayores a un año de edad, con un tiempo prolongado de infección aunadas a la presentación de un cuadro clínico característico, altamente sugerente a PTB, se pueden llegar a considerar un diagnóstico definitivo de MAP en lo individual, difícilmente descartado por otras pruebas como cultivo y PCR como lo mencionan varios autores (Pérez et al., 1999; Dennis et al., 2011; Windsor, 2015; Whittingtong et al., 2019).

Considerando que los nueve animales a los que se les realizó la necropsia presentaron lesiones características a PTB, sólo en el 55.5% (5/9) se logró el aislamiento bacteriano a pesar de presentar lesiones de tipo multibacilar en ocho de los nueve. La dificultad del aislamiento de MAP, el medio de cultivo empleado considerando la posible variación del tipo de MAP presente, “S” o “C”, los que presentan una diferencia de requerimientos nutricionales para su crecimiento (Elguezabal et al., 2011; Whittington, 2011, Stevenson, 2015; Whittington et al., 2019), o al momento del proceso de la descontaminación bacteriana, donde se puede reducir el número de bacterias viables para su cultivo y aislamiento. El aislamiento y cultivo del microorganismo en ovinos es extremadamente difícil, siendo en rebaños ovinos que el cultivo fecal detecta menos de los casos clínicos y requiere más de 12 meses para su incubación según reportan Windsor (2015), así como Whittington, 2010.

La posterior confirmación e identificación de los aislamientos obtenidos de MAP por medio de PCR IS900, realizada a partir de los cinco cultivos obtenidos, confirmó la presencia de MAP. Algunos autores en la actualidad sugieren que la identificación de la bacteria por PCR sea realizada a partir de las muestras obtenidas de los tejidos, agilizando el tiempo de los resultados, sin depender directamente de los cultivos obtenidos, ya que los tiempos de diagnóstico se prolongan por las características propias del aislamiento de MAP, indicando que esta prueba presenta una similar eficacia con los cultivos (Kawaji et al., 2007; Nilsen et al., 2008; Whittington et al., 2019).

De acuerdo con autores como Kumthekar, et al., (2013) y Konbon (2018) el determinar el grado de infección de la enfermedad en los rebaños, permite establecer programas de control adecuados que impacten significativamente en el costo - beneficio; considerando principalmente la prueba - desecho. Pues ante la inviabilidad de desechar y considerando la poca disponibilidad de algunos productores para la vacunación de los rebaños, las medidas de control deben enmarcarse hacia un fortalecimiento de la bioseguridad.

Considerando así la separación temprana de los corderos y la eliminación de animales con signología inicial clínica de la enfermedad, puede ser una medida que impacte positivamente a la reducción de la prevalencia de la enfermedad (Robee, 2011; Windsor 2015). Haciendo hincapié en que profesionistas del sector salud animal y líderes del sector productivo tengan un conocimiento claro del grado de presencia e impacto de la enfermedad, tanto clínica, económicamente y de salud pública; logrando así propuestas de control (Roche, 2015; Windsor, 2015; Wittington et al., 2019)

Se confirma la presencia del Mycobacterium avium subsp paratuberculosis como agente etiológico de la enfermedad clínica, además de observar la presencia elevada de frecuencia de animales seropositivos a MAP, en rebaños del Valle Central del estado de Aguascalientes, México. Lo cual la convierte en una patología de alto impacto en la producción ovina del estado.