av Abanico veterinario Abanico vet 2007-428X 2448-6132 Sergio Martínez González 10.21929/abavet2020.37 00128 Artículos originales Microbiota vaginal y susceptibilidad quimioterapéutica en cabras criollas Flores-Hernández Wilfrido 1 Luna-Castro Gabriela 1 Peña-Avelino Luz 1 Barrios-García Hugo 1 Alva-Pérez Jorge 1 Facultad de Medicina Veterinaria “Dr. Norberto Treviño Zapata”. Universidad Autónoma de Tamaulipas. Ciudad Victoria, Tamaulipas, México. Universidad Autónoma de Tamaulipas Facultad de Medicina Veterinaria “Dr. Norberto Treviño Zapata” Universidad Autónoma de Tamaulipas Ciudad Victoria Tamaulipas Mexico Autor responsable y de correspondencia: Jorge Alva-Pérez. Carretera Victoria-Mante km 5. CP. 87000, Ciudad Victoria, Tamaulipas, México. wii_09@hotmail.com, sarahi.luna@docentes.uat.edu.mx, lypena@docentes.uat.edu.mx, hbarrios@docentes.uat.edu.mx jalva@docentes.uat.edu.mx. 28 02 2021 Jan-Dec 2020 10 e128 06 07 2020 26 11 2020 Este es un artículo publicado en acceso abierto bajo una licencia Creative Commons RESUMEN:

El objetivo de este trabajo fue determinar la microbiota vaginal aerobia de cabras criollas, así como el perfil de susceptibilidad a quimioterapéuticos. Se tomaron muestras de mucosa vaginal de 51 hembras caprinas sanas en edad reproductiva mediante hisopos estériles. Las muestras fueron procesadas bajo técnicas de identificación bacteriológica estándar. Se obtuvo aislamiento bacteriano en el 41.2% de las muestras. Las bacterias aisladas con mayor frecuencia fueron cocos Gram positivos (GP) (65.6%), los géneros principales identificados fueron Staphylococcus spp. (31.2%) y Aerococcus spp. (21.9%). En cuanto a bacterias Gram negativas (GN), los aislamientos correspondieron a Escherichia coli (15.6%). Del perfil de resistencia a antibióticos los aislamientos de Aerococcus y Corynebacterium jeikeium, en proporción, fueron los más susceptibles a los antibióticos analizados contra bacterias GP. Los antibióticos con menor perfil de resistencia ante aislamientos GP fueron dicloxacilina, cefotaxima y ampicilina. Los aislamientos de E. coli mostraron ser altamente resistentes a todos los antibióticos probados (95%), siendo ciprofloxacina el antibiótico con menor resistencia (60%). Los hallazgos de este trabajo ponen de manifiesto la importancia de la microbiota vaginal en cabras criollas como agentes ecológicos con potencial patogénico, además de demostrar la alta resistencia de estas bacterias a agentes quimioterapéuticos.

 Palabras clave: producción caprina microbiota vaginal susceptibilidad antimicrobiana SAGARPA CONACYT 2017-02-291311 INTRODUCCIÓN

Se denomina microbiota a la población, residente o transitoria, de microorganismos y virus que viven en los epitelios de los animales, creando un ecosistema (Pascale et al., 2018). En este ecosistema los procariontes (bacterias principalmente, aunque también hay arqueas) son los organismos más abundantes. Generalmente, estos microorganismos viven en un estado de simbiosis con el hospedador. Por otro lado, el desbalance del ambiente y del sistema inmune puede desencadenar efectos negativos sobre la salud de los hospedadores, además algunos microorganismos de la microbiota pueden tornarse patógenos (Maynard et al., 2012; Belkaid et al., 2013). En rumiantes es bien conocido el papel de la microbiota ruminal en la digestión de la celulosa, lo que permite la obtención de energía para estos animales (Henderson et al. 2015).

Se ha determinado que la microbiota vaginal (MV) en rumiantes varía conforme el estado fisiológico/reproductivo, ciclo estral y en menor medida por la raza (Giannattasio-Ferraz et al., 2019; Manes et al., 2018). En ovinos y caprinos el análisis de la MV ha cobrado relevancia en los últimos años, debido al uso de tecnologías reproductivas (uso de progestágenos, prostaglandinas y gonadotropinas), principalmente en la ganadería intensiva(Suárez et al., 2006; Martins et al., 2009; Penna et al., 2013; Oliveira et al., 2013; Manes et al., 2013; Manes et al., 2018). Se conoce parcialmente la composición de la MV en cabras; se ha reportado que está compuesta principalmente por bacterias Gram positivas (GP) y en menor medida por Gram negativas (GN) (Manes et al., 2013). En cabras el cambio en la composición de la MV por el uso de dispositivos vaginales que contienen progestágenos se ha vinculado con vaginitis y con infertilidad (Penna et al., 2013).

En México la producción caprina está ligada a las clases sociales con ingresos económicos bajos, siguiendo un modelo primordialmente de subsistencia (Pinos-Rodríguez et al., 2015). En Tamaulipas, México, la producción caprina está dirigida a la producción de cabrito destetado de 21 días de edad. El tipo de producción característico del noreste mexicano es un sistema extensivo dependiente de recursos naturales de la región (Alva-Pérez et al., 2019). Aunque las cabras son animales rústicos, adaptables a diferentes condiciones ambientales, los problemas en la fertilidad y concepción de las cabras son comunes en la producción (Salinas-González et al., 2016). El conocimiento de la MV en cabras criollas puede poner de manifiesto la población bacteriana oportunista, misma que pudiera desencadenar vaginitis clínicas y subclínicas. Este conocimiento puede sentar las bases para determinar el grado de participación de las infecciones del sistema reproductor en los problemas de producción en cabras. Aunado a ello, el conocimiento del perfil de susceptibilidad a quimioterapéuticos de las bacterias que conforman la MV contribuye a mejorar el tratamiento de estas infecciones.

 MATERIAL Y MÉTODOS

Manejo animal y sitio de muestreo. El presente trabajo se llevó a cabo en el municipio de Jaumave, Tamaulipas localizado entre los paralelos 23º 53´ y 23º 04´ latitud norte, y los meridianos 99º 41´ y 99º 10´ longitud oeste, con una altura de 735 msnm promedio. La orografía es principalmente montañosa, con un clima semiseco semicálido con lluvias en verano (INEGI, 2010). El inventario caprino en este municipio reportado en el año 2018 fue de 3,931 cabezas (SIAP, 2019). Se muestrearon cinco unidades de producción (UP) durante junio de 2019. En cada UP se tomaron 10 muestras, a excepción de la última en dónde se tomaron 11 muestras, para un total de 51 muestras de hisopados vaginales. Los hatos caprinos presentan una población que mezcla varias razas (población criolla), con encastes predominantes de Boer, Alpino, Nubia y Toggenbourgh (Alva-Pérez et al., 2019). El criterio de inclusión fue hembras sanas y en edad reproductiva (2 a 4 años). El criterio de exclusión fue hembras enfermas o gestantes. El muestreo fue realizado bajo estándares éticos de bienestar animal, y fue autorizado por el Comité de Bioética y Bienestar Animal de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma de Tamaulipas (oficio número CBBA_19_05).

Obtención de muestras y procesamiento. En las hembras seleccionadas se realizó restricción física momentánea con el mínimo estrés posible, para insertar un hisopo estéril en el vestíbulo vaginal. Los hisopos fueron frotados suavemente sobre las paredes de la mucosa vaginal para posteriormente ser colocados en medio de transporte estéril (Dehydrated culture media: transport medium amies; BD Difco, Maryland EU). Los hisopos se conservaron en refrigeración hasta su procesamiento en un periodo no mayor a 12 horas. Todo el procesamiento bacteriológico de las muestras fue llevado a cabo en el Laboratorio de Diagnóstico de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma de Tamaulipas. Para el aislamiento e identificación de los microorganismos los hisopos fueron sembrados en agar sangre (Base agar sangre; Becton Dickinson-Bioxon, Querétaro México) y agar tripticaseína de soja (BD Difco, Maryland EU). Las muestras fueron incubadas en condiciones de aerobiosis, 37º C durante 24 a 48 horas.

Los diferentes aislamientos fueron identificados tanto macroscópicamente (morfología colonial, producción de pigmento y hemólisis) como microscópicamente (tinción de Gram). La identificación bacteriana final se logró a través de las siguientes pruebas bioquímicas: catalasa (Peróxido de hidrógeno; Merck, Darmstadt Alemania), oxidasa (n, n, n´, n´-tetrametil-1,4-fenilendiamina, Biomerieux México, Estado de México), rojo de metilo-Voges Proskauer (Becton Dickinson Bioxon, Querétaro México), reducción de nitratos (BD Difco, Maryland EU), ureasa (Caldo urea; Becton Dickinson-Bioxon, Querétaro México), indol, ácido sulfhídrico y motilidad (medio SIM; Dibico, Estado de México México), crecimiento en agar McConkey (BD Difco, Maryland EU), triple azúcar hierro (Agar de hierro y triple azúcar, Becton Dickinson-Bioxon, Querétaro México), citrato (BBL Simmons Citrate Agar; Becton Dickinson, Le Point de Claix Francia) y utilización de los siguientes carbohidratos: maltosa, manitol, xilosa, lactosa y sorbitol (todos de Becton Dickinson Bioxon, Querétaro México, preparados con rojo fenol, caldo base rojo de fenol BD Difco, Maryland EU). La identificación se realizó siguiendo los estándares del manual de identificación bacteriana de Cowan y Steel (Barrow y Feltman, 2004).

Susceptibilidad a quimioterapéuticos. Los aislamientos fueron evaluados en diferentes antibióticos, a través del método de difusión en disco (Humphries et al. 2018). Brevemente se describe a continuación. Se seleccionaron 3 UFC de cada aislamiento en cultivo puro, mismas que fueron sembradas en caldo tripticaseína de soya (BD Difco, Maryland EU) e incubadas a 37º C en agitación (200 rpm). El tiempo de incubación varió para cada aislamiento, hasta obtener un inóculo equivalente al estándar 0.5 McFarland (0.05 ml de 1% de BaCl2 [Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri Estados Unidos] y 9.95 ml de 1% de H2SO4 [Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri Estados Unidos]) de turbidez, correspondiente a 1 a 2 × 106 UFC/ml en bacterias GP y 5 × 108 UFC/ml en bacterias GN. Se sembró 1ml de cada aislamiento en agar Müller-Hinton (MH, BD Difco, Marylando EU). Los siguientes sensidiscos (Investigación Diagnóstica; Ciudad de México, México) fueron utilizados: ampicilina (10 µg, Staphylococcus spp.: fenotipo resistente (FR): < 28 mm; fenotipo susceptible (FS): > 29 mm; otros géneros bacterianos: FR: < 21 mm; FS: > 22 mm), cefalotina (30 µg, FR: < 14 mm, FS: > 15 mm), cefotaxima (30 µg, FR: < 14 mm, FS: > 15 mm), ciprofloxacino (5 µg, FR: < 15 mm, FS: > 16 mm), clindamicina (30 µg, FR:< 14 mm, FS: > 15 mm), dicloxacilina (1 µg, FR: < 10 mm, FS: > 11 mm), eritromicina (15µg, FR: < 13 mm, FS: > 14 mm), gentamicina (10 µg, FR: < 12 mm, FS: > 13 mm), penicilina (10 U, Staphylococcus spp.: FR: < 28 mm, FS: > 29 mm, otros géneros GP: FR: < 14 mm; FS: > 15 mm), sulfametoxazol-trimetroprim (25 µg, FR: < 10 mm, FS: > 11 mm), tetraciclina (30 µg, FR: < 14 mm, FS: > 15 mm), vancomicina (30 µg, FR: < 14 mm, FS: > 15 mm), cloranfenicol (30 µg, FR: < 12 mm, FS: > 13 mm), carbenicilina (100 µg, FR: < 18 mm, FS: > 19 mm), netilmicina (30 µg, FR: < 12 mm, FS: > 13 mm), nitrofurantoína (300 µg, FR: < 14 mm, FS: > 15 mm), norfloxacino (100 µg, FR: < 18 mm, FS: > 19 mm) y amikacina (30 µg, FR: < 14 mm, FS: > 15 mm). Los quimioterapéuticos clindamicina, dicloxacilina, eritromicina, penicilina, tetraciclina y vancomicina fueron probados únicamente en aislamientos GP; mientras que cloranfenicol, carbenicilina, netilmicina, nitrofurantoína, norfloxacino y amikacina se probaron únicamente en aislamientos GN. Las zonas de inhibición en cada sensidisco se midieron con una regla después de 16 a 18 h de incubación a 37º C. Los aislamientos con una susceptibilidad intermedia se consideraron resistentes, ya que estas poblaciones bacterianas presentan subpoblaciones de bacterias resistentes que transmitirán este fenotipo a las bacterias susceptibles (Hombach et al. 2013; Maurer et al. 2014).

Análisis estadístico. Los resultados de identificación bacteriana de las diferentes muestras se presentan a través de estadística descriptiva y tablas de frecuencia. Para los resultados de la prueba de susceptibilidad a quimioterapéuticos se construyeron tablas de contingencia con la prueba de chi cuadrada con un nivel de significancia de P < 0.05 mediante el procedimiento de PROC FREQ del programa SAS (2002, v9.0. SAS Institute Inc., Cary, NC., USA) para conocer los porcentajes de resistencia. Además, se realizó un análisis de varianza en un modelo lineal generalizado usando el PROC GLM y la prueba de diferencia mínima significativa (LSD, prueba exacta de Fisher) para la comparación del perfil de resistencia entre antibióticos con una P < 0.05. Para este análisis se realizó la conversión de los valores porcentuales en valores en un rango de 0 a 1.

 RESULTADOS

Aislamiento e identificación bacteriana. De las 51 muestras únicamente 21 (41.2%) resultaron positivas al aislamiento bacteriológico. De estas 21 muestras se aislaron e identificaron 32 bacterias (Cuadro 1).

Identificación y frecuencia de los aislamientos bacteriológicos de las muestras vaginales de cabras<bold>.</bold>
Frecuencia
Bacterias Gram positivas
Staphylococcus spp. 31.2% (10/32)
Aerococcus spp. 21.9% (7/32)
Corynebacterium jeikeium 15.6% (5/32)
Staphylococcus chromogenes 6.3% (2/32)
Corynebacterium renale 3.1% (1/32)
Staphylococcus xylosus 3.1% (1/32)
Streptococcus spp. 3.1% (1/32)
Bacterias Gram negativas
Escherichia coli 15.6% (5/32)

Susceptibilidad a quimioterapéuticos. En el análisis del perfil de resistencia antimicrobiana para las bacterias GP es de notar que todas los aislados fueron resistentes a eritromicina y tetraciclina (Cuadro 2). Los aislados de Staphylococcus spp. tuvieron un porcentaje general de resistencia de 87.5% (χ2= 18.51, p=0.0704), siendo la penicilina el antibiótico con menor resistencia (70%). Los dos aislamientos de S. chromogenes tuvieron la menor resistencia entre los antibióticos probados (70.8%), sin diferencia entre ellos (χ2= 16.73, p=0.1158). Los aislamientos de C. renale, S. xylosus y Streptococcus spp. tuvieron porcentajes de resistencia de 83.3% (χ2= 12.0, p=0.3636), 91.7% (χ2= 12.0, p=0.3636) y 83.3% (χ2= 12.0, p=0.3636), respectivamente. Por otro lado, los aislamientos del género Aerococcus spp. (resistencia 80.9%) mostraron una resistencia menor contra dicloxacilina (28.6%, χ2= 22.85, p=0.0185), en comparación con los demás antibióticos. Así mismo, los aislamientos de C. jeikeium mostraron un menor porcentaje de resistencia ante cefotaxima y ampicilina (20% y 40%, respectivamente χ2= 34.9, p<0.001) en contraste con los demás antibióticos. Para estas bacterias la resistencia fue de 85%. Bajo las condiciones de este trabajo los aislamientos GP tuvieron un perfil de resistencia de 83.2%.

Porcentaje de resistencia en aislados vaginales de cabras criollas
Bacterias (n)% Quimioterapeutico
Gram + AMP CEF CFT CIP CLI DIC ERI GEN PEN STM TET VAN
Staphylococcus spp. (10) 37 80 90 100 80 90 80 100 80 70 100 100 100
Aerococcus spp. (7) 25.9 57.2 71.4 85.7 85.7 100 28.6 100 85.7 85.7 71.4 100 100
C. jeikeium (5) 18.5 40 100 20 100 100 100 100 100 100 100 100 60
S. chromogenes (2) 7.4 50 0 0 100 100 0 100 100 50 100 100 100
C. renale (1) 3.7 0 100 100 100 100 100 100 0 100 100 100 100
S. xylosus (1) 3.7 100 100 100 100 0 100 100 100 100 100 100 100
Streptococcus spp. (1) 3.7 100 100 100 100 0 100 100 0 100 100 100 100
Gram- AMP CEF CFT CIP CLO CAR NET GEN NIT NOT STM AMI
Escherichia coli (5) 100 100 100 100 60 100 100 100 100 80 100 100 100

AMP: ampicilina, CEF: cefalotina, CFT: cefotaxima, CIP: ciprofloxacino, CLI: clindamicina, DIC: dicloxacilina, ERI: eritromicina, GEN: gentamicina, PEN: penicilina, STM: sulfametoxazol-trimetroprim, TET: tetraciclina, VAN: vacomicina, CLO: cloranfenicol, CAR: carbenicilina, NET: netilmicina, NIT: nitrofurantoína, NOT: norfloxacino y AMI: amikacina.

Para las enterobacterias (aislamientos GN) el porcentaje general de resistencia fue del 95%, la mayoría de los antibióticos probados tuvieron una resistencia del 100%, a excepción de ciprofloxacina (60%) y nitrofurantoína (80%), cuyas resistencias fueron menores al resto de los antibióticos (p < 0.05, cuadro 3).

Comparación del patrón de resistencia entre antibióticos
Bacterias Quimioterapéutico
AMP CEF CFT CIP CLI DIC ERI GEN PEN STM TET VAN EEM
(P)
Gram + 0.63cd 0.81abc 0.77cd 0.85ab 0.93ab 0.59d 1.0a 0.81abc 0.81abc 0.93ab 1.0a 0.93ab 0.124
(0.0001)
AMI AMP CAR CEF CFT CIP CLO GEN NET NIT NOT STM EEM
(P)
Gram - 1.0a 1.0a 1.0a 1.0a 1.0a 0.6b 1.0a 1.0a 1.0a 0.8b 1.0a 1.0a 0.002
(0.05)

AMP: ampicilina, CEF: cefalotina, CFT: cefotaxima, CIP: ciprofloxacina, CLI: clindamicina, DIC: dicloxacilina, ERI: eritromicina, GEN: gentamicina, PEN: penicilina, STM: sulfametoxazol-trimetroprim, TET: tetraciclina, VAN: vacomicina, CLO: cloranfenicol, CAR: carbenicilina, NET: netilmicina, NIT: nitrofurantoína, NOT: norfloxacino y AMI: amikacina. EEM: error estándar de la media. Valores de la media con el mismo superíndice no son significativamente diferentes. Los datos porcentuales fueron transformados para ser analizados a través de la prueba exacta de Fisher.

La comparación entre los perfiles de resistencia muestra que dicloxacilina tuvo mayor efectividad entre las bacterias GP (0.59, Cuadro 3), similar al perfil de resistencia de ampicilina (0.63) y cefotaxima (0.77). El promedio general de resistencia para los antibióticos probados contra bacterias GP fue de 0.84, mientras que el promedio general de resistencia de los antibióticos probados contra bacterias GN fue de 0.95.

 DISCUSIÓN Aislamiento e identificación bacteriana.

Las condiciones ambientales de la MV de rumiantes favorecen el desarrollo de una microbiota conforme al desarrollo fisiológico. Esta población no permite, en general, el desarrollo de microorganismos patógenos o saprofíticos (Otero et al., 2000 ). El comprometimiento de la integridad de la mucosa vaginal, así como las alteraciones de la microbiota, pueden desencadenar infecciones ascendentes del tracto urogenital, poniendo en riesgo la salud reproductiva de cabras (Ababneh y Degefa, 2006), vacas (Otero et al., 2000) y ovejas (Sargison et al., 2007).

A partir de las hisopados vaginales el 41.2% de las muestras presentaron crecimiento bacteriológico. Manes et al., 2013 reportaron 52% de muestras positivas al aislamiento en cabras Saanen en etapa reproductiva, mientras que Penna et al., 2013 reportaron un 77% de muestras positivas en cabras Saanen en condiciones de anestro gestacional. Por otro lado, Oliveira et al., 2013 reportaron 100% de aislamiento bacteriano en cabras anéstricas Toggenbourgh, mientras que Ababneh y Degfa 2006 reportaron 75% de aislamiento en cabras Baladi post-parto. Estos diferentes resultados indican la alta variabilidad del aislamiento bacteriano que puede ser debido tanto a la raza, estado reproductivo y estado fisiológico. Esta investigación muestra que, en cabras criollas, sin una definición aparente de estacionalidad reproductiva, el aislamiento de la microbiota bacteriana aerobia no es mayor al 50%. Se requiere de más estudios para relacionar el estado fisiológico y el perfil racial con el aislamiento bacteriológico.

En este estudio se muestra que la población bacteriana aerobia predominante en cabras criollas sanas fue bacterias GP (84.4%) y en menor medida bacterias GN (15.6%). Diversos estudios concuerdan con nuestros resultados. Manes et al., 2013 aislaron 77% de bacterias GP en cabras Saanen antes de la inserción de esponja vaginal con 60 mg de acetato medroxiprogesterona para la sincronización del estro; mientras que Penna et al., 2013 aislaron 71.3% de bacterias GP, siendo Staphylococcus coagulasa negativos (CoNS) las principales bacterias aisladas. Este hallazgo coincide con nuestro trabajo, ya que el mayor número de bacterias aisladas pertenecieron al género Staphylococcus spp. (31.2%), aunado al aislamiento de S. chromogenes (6.3%) y S. xylosus (3.1%). Oliveira et al., 2013 también aislaron Staphylococcus spp. en 63.6% de hisopados vaginales en cabras anéstricas. Estos hallazgos pueden indicar que el género Staphylococcus es habitante primario en la MV en cabras. No se ha reportado la presencia de vaginitis en estos animales asociado a este género bacteriano (Oliveira et al. 2013), tal como ocurre en otras especies (Deng et al., 2019; Shea et al., 2019), indicando que en estos hospedadores pueden ser patógenos oportunistas.

El segundo grupo bacteriano aislado de los hisopados vaginales fue Aerococcus spp. con un porcentaje de 21.9%. Esta bacteria GP ha sido asociada a infecciones urinarias oportunistas en bovinos (Liu et al., 2019). Previamente se ha reportado su presencia en mucosa vaginal de cabras, sin signos de infección (Meekins et al., 2017). Esto podría indicar que, al igual que Staphyloccocus spp, el género Aerococcus es un habitante normal de la mucosa vaginal en cabras.

En proporción, los aislamientos de C. jeikeium y E. coli fueron similares (15.6%). C. jeikeium, bacilo GP, ha sido relacionado con mastitis subclínica en ovejas (Queiroga, 2017). No existen reportes de la presencia de este bacilo en cabras, y con base a la frecuencia de aislamientos de esta bacteria en este estudio, es probable que sea parte de la MV autóctona de cabras criollas en el noreste mexicano. En contraste, E. coli es una enterobacteria ampliamente distribuida, es la principal bacteria que forma parte de la microbiota intestinal en animales domésticos (excepto aves). El aislamiento de esta enterobacteria en regiones anatómicas fuera del intestino está relacionado con infecciones patógenas y oportunistas (Gyles y Fairbrother, 2010). En rumiantes ha sido relacionada como causa de aborto e infecciones urogenitales (Sargison et al., 2007). En cabras esta enterobacteria se ha reportado tanto en ausencia de vaginitis como en procesos inflamatorios (Martins et al., 2009; Oliveira et al., 2013). La presencia de E. coli en este trabajo puede sugerir, por tanto, una colonización oportunista.

El aislamiento de C. renale puede representar un hallazgo incidental, ya que no ha sido reportado previamente como parte de la MV en cabras. Sin embargo, este microrganismo puede producir diversas infecciones urinarias en cabras y ovejas, aunque es poco común (Moore et al., 2010). Adicionalmente se ha aislado en vacas clínicamente sanas, comportándose como patógeno oportunista, produciendo cistitis, uretritis y pielonefritis (Yeruham et al., 2006), debido a su adaptabilidad ambiental (Moore et al., 2010). El aislamiento de C. renale en la mucosa vaginal de cabras criollas puede, al igual que E. coli, representar la colonización de una bacteria oportunista.

Finalmente, Streptococcus spp. se encontró en una proporción baja (3.1%), comparado con los otros cocos GP. Penna et al., 2013 reportaron el aislamiento de estos agentes en 51.1% en hisopados vaginales, antes de la inserción de esponja vaginal, indicando que estas bacterias forman parte de la MV. Por otro lado, este género bacteriano se ha relacionado ampliamente como patógeno de cabras produciendo mastitis (Steward et al., 2017). No se ha reportado la presencia de vaginitis o infecciones urinarias a causa de especies de Streptococcus spp. Es probable que el hallazgo en este trabajo corresponda evidentemente a MV, tal como lo sugiere Penna et al., 2013.

 Susceptibilidad a quimioterapéuticos

En este trabajo se mostraron diferentes perfiles de susceptibilidad a antibióticos, tanto para bacterias GP como GN. La diferencia de susceptibilidad entre estos dos grupos bacterianos (83.2% de GP contra 95% de GN) debe ser tomado con reserva, ya que en las bacterias GN se aislaron en menor cantidad a partir de los hisopados. Sin embargo, es de hacer notar la alta resistencia de los aislamientos a la acción de los antibióticos, considerando que éstos son parte de la MV, y que por tanto, no han sido sometidos extensivamente a antibioterapia.

De los antibióticos probados eritromicina y tetraciclina mostraron ser completamente ineficaces contra los aislamientos GP, mientras que todos los antibióticos probados contra GN resultaron ineficaces, a excepción de ciprofloxacina y nitrofurantoína. Al respecto Oliveira et al., 2013 y Penna et al., 2013 consideran que el uso irrestricto de antibióticos en la promoción del crecimiento, así como en el tratamiento de animales jóvenes de enfermedades diarreicas y respiratorias, puede predisponer a la propagación de resistencia, tal como ha sido evidenciado para bacilos GN (Moghaddam et al., 2015).

Del perfil de resistencia en GP, S. chromogenes, S. xylosus, C. renale y Streptococcus spp. mostraron ser completamente susceptibles al menos a un antibiótico. Adicionalmente, los aislamientos del género Aerococcus y C. jeikum mostraron la mayor susceptibilidad probados ante dicloxacilina y, cefotaxima y ampicilina, respectivamente. De estos fármacos, únicamente ampicilina ha sido reportada por tener alta efectividad contra aislamientos bacterianos (principalmente contra Staphylococcus spp) de la mucosa vaginal, con porcentajes de 50 al 100% (Suárez et al., 2006; Martins et al., 2009; Oliveira et al., 2013; Manes et al., 2013) lo cual pone de manifiesto la efectividad de este antibiótico para el tratamiento de las vaginitis cuya etiología sea bacterias GP. Por otro lado, la principal etiología de las vaginitis bacterianas en pequeños rumiantes son bacterias coliformes (Ababneh y Degefa, 2006; Martins et al., 2009; Oliveira et al., 2013). Con relación a ello, en los aislamientos de E. coli únicamente ciprofloxacina mostró el menor porcentaje de resistencia (60%). Al respecto Oliveira et al., 2013 mostraron que la ciprofloxacina fue 100% eficaz en el control de los aislamientos de E. coli, procedentes de aislados vaginales de cabras; de la misma forma que Martins et al., 2009 mostraron 100% de efectividad en bacterias coliformes procedentes de aislados vaginales de ovejas. Esto puede demostrar la rapidez con la cual E. coli puede desarrollar resistencia a la ciprofloxacina, por lo que es muy importante crear la concientización tanto a productores como a clínicos veterinarios en el uso responsable de antibióticos.

 CONCLUSIÓN

La MV aerobia de las cabras criollas del municipio de Jaumave, Tamaulipas está compuesta principalmente por bacterias GP (población representada principalmente por el género Staphylococcus spp) y en menor medida por bacterias GN (Escherichia coli). El aislamiento bacteriológico de los hisopados vaginales representó el 41.2% de las muestras, indicando que otro tipo de bacterias (nutricionalmente exigentes) pudieran estar formando parte de la MV. La MV aerobia GP encontrada demostró ser altamente resistente a eritromicina, tetraciclina y vancomicina, mientras que los aislamientos GN fueron resistentes a la mayoría de los quimioterapéuticos evaluados, a excepción de criprofloxacina y nitrofurantoína (con un perfil de resistencia del 60% y 80%, respectivamente). El alto porcentaje de resistencia encontrada en este trabajo pone de manifiesto la importancia de un uso responsable de antibióticos en la producción caprina extensiva.

 AGRADECIMIENTOS

Al proyecto SAGARPA CONACYT 2017-02-291311 “Desarrollo y transferencia de pruebas diagnósticas para lentivirus y microorganismos causantes de aborto: Chlamydia spp., Brucella melitensis, Leptospira spp. y Coxiella burnetti, en ovinos y caprinos”. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autónoma de Tamaulipas, al Laboratorio de Diagnóstico de la FMVZ-UAT y al personal técnico-administrativo

 LITERATURA CITADA Ababneh MM, Degefa T. 2006. Bacteriological findings and hormonal profiles in the postpartum Balady goats. Reproduction in Domestic Animals. 41(1):12-16. http://dx.doi.org/10.1111/j.1439-0531.2006.00638.x Ababneh MM Degefa T. 2006 Bacteriological findings and hormonal profiles in the postpartum Balady goats Reproduction in Domestic Animals 41 1 12 16 10.1111/j.1439-0531.2006.00638.x Alva-Pérez J, López-Corona LE, Zapata-Campos CC, Vázquez-Villanueva J, Barrios-García HB. 2019. Condiciones productivas y zoosanitarias de la producción caprina en el altiplano de Tamaulipas, México. 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Clave:2020-57

 Original Article Vaginal microbiota and antimicrobial susceptibility in creole goats ABSTRACT:

This work´s aim was the aerobic vaginal microbiota determination of creole goats and its antimicrobial susceptibility. Vaginal swabs were taken of 51 healthy female goats in reproductive age. Samples were processed under standard bacteriological conditions. Bacterial isolation was achieved in 41.2% of the samples. Gram-positive (GP) cocci were the most abundant bacteria recovered (65.6%), the principal genera detected were Staphylococcus spp. (31.2%) and Aerococcus spp. (21.9%). Escherichia coli was the only Gram-negative (GN) genus detected. In the antimicrobial susceptibility test Aerococcus and Corynebacterium jeikeum were the most susceptible GP bacteria. Dicloxacillin, cefotaxime, and ampicillin had the lowest resistance pattern on GP bacteria. On the other hand, E. coli isolates showed high resistance to all antibiotics (95%), except for ciprofloxacin (60%). This work findings exhibit the importance of vaginal microbiota of creole goats as potential pathogenic ecological agents, as well as it showed the high antimicrobial resistance pattern of this bacteria.

 Keywords: goat production vaginal microbiota antimicrobial susceptibility INTRODUCTION

The microbiota is the population, resident or transitory, of microorganisms and viruses that live in the epithelia of animals, creating an ecosystem (Pascale et al., 2018). In this ecosystem, prokaryotes (mainly bacteria, although there are also archaea) are the most abundant organisms. Generally, these microorganisms live in a state of symbiosis with the host. On the other hand, the imbalance of the environment and the immune system can trigger negative effects on the health of the hosts, and some microorganisms of the microbiota can become pathogenic (Maynard et al., 2012; Belkaid et al., 2013). In ruminants, the role of the ruminal microbiota in the digestion of cellulose is well known, which allows obtaining energy for these animals (Henderson et al. 2015).

It has been determined that the vaginal microbiota (VM) in ruminants varies according to the physiological/reproductive state, estrous cycle and to a lesser extent by breed (Giannattasio-Ferraz et al., 2019; Manes et al., 2018). In sheep and goats, the VM analysis has gained relevance in recent years, due to the use of reproductive technologies (use of progestogens, prostaglandins and gonadotropins), mainly in intensive livestock (Suárez et al., 2006; Martins et al., 2009; Penna et al., 2013; Oliveira et al., 2013; Manes et al., 2013; Manes et al., 2018). The composition of VM in goats is partially known. It has been reported that it is composed mainly of Gram positive bacteria (GP) and to a lesser extent Gram negative (GN) (Manes et al., 2013). In goats, the change in VM composition due to the use of vaginal devices containing progestogens has been associated with vaginitis and infertility (Penna et al., 2013).

In Mexico, goat production is linked to social classes with low economic income, following a primarily subsistence model (Pinos-Rodríguez et al., 2015). In Tamaulipas, Mexico, goat production is aimed at the production of 21-day-old weaned kid. The type of production characteristic of northeastern Mexico is an extensive system dependent on natural resources in the region (Alva-Pérez et al., 2019). Although goats are rustic animals, adaptable to different environmental conditions, fertility and conception problems in goats are common in production (Salinas-González et al., 2016). Knowledge of VM in Creole goats can reveal the opportunistic bacterial population, which could trigger clinical and subclinical vaginitis. This knowledge can provide the basis for determining the degree of involvement of reproductive system infections in production problems in goats. In addition to this, knowledge of the chemotherapeutic susceptibility profile of the bacteria that make up the VM contributes to improving the treatment of these infections.

 MATERIAL AND MÉTODOS

Animal management and sampling site. The present work was carried out in Jaumave municipality, Tamaulipas located between the parallels 23º 53´ and 23º 04´ north latitude, and the meridians 99º 41´ and 99º 10´ west longitude, with an average height of 735 meters above sea level. The orography is mainly mountainous, with a semi-dry semi-warm climate with rains in summer (INEGI, 2010). The goat inventory in this municipality reported in 2018 was 3,931 heads (SIAP, 2019). Five production units (PU) were sampled during June 2019. In each PU, 10 samples were taken, except for the last one, where 11 samples were taken, for a total of 51 vaginal swab samples. The goat herds present a population that mixes several races (Creole population), with predominant encastes of Boer, Alpino, Nubia and Toggenbourgh (Alva-Pérez et al., 2019). The inclusion criteria were healthy females of reproductive age (2 to 4 years). The exclusion criterion was sick or pregnant females. The sampling was carried out under ethical standards of animal welfare, and was authorized by the Bioethics and Animal Welfare Committee of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechnics of the Autonomous University of Tamaulipas (official letter number CBBA_19_05).

Sample collection and processing. In the selected females, momentary physical restraint was carried out with the minimum possible stress, to insert a sterile swab in the vaginal vestibule. The swabs were gently rubbed on the walls of the vaginal mucosa to later be placed in a sterile transport medium (Dehydrated culture media: transport medium amies; BD Difco, Maryland EU). The swabs were kept refrigerated until processing in a period no longer than 12 hours. All the bacteriological processing of the samples was carried out in the Diagnostic Laboratory of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechnics of the Autonomous University of Tamaulipas. For the isolation and identification of the microorganisms, the swabs were sown on blood agar (Blood agar base; Becton Dickinson-Bioxon, Querétaro Mexico) and trypticasein soy agar (BD Difco, Maryland USA). The samples were incubated under aerobic conditions, 37º C for 24 to 48 hours.

The different isolates were identified both macroscopically (colonial morphology, pigment production, and hemolysis) and microscopically (Gram stain). Final bacterial identification was achieved through the following biochemical tests: catalase (Hydrogen peroxide; Merck, Darmstadt Germany), oxidase (n, n, n´, n´-tetramethyl-1,4-phenylenediamine, Biomerieux México, Estado de México), methyl red-Voges Proskauer (Becton Dickinson Bioxon, Querétaro México), nitrate reduction (BD Difco, Maryland EU), urease (Caldo urea; Becton Dickinson-Bioxon, Querétaro México), indole, hydrogen sulfide and motility (SIM medium; Dibico, Estado de México México), growth on McConkey agar (BD Difco, Maryland EU), triple sugar iron (Iron and triple sugar agar, Becton Dickinson-Bioxon, Querétaro México), citrate (BBL Simmons Citrate Agar ; Becton Dickinson, Le Point de Claix France) and use of the following carbohydrates: maltose, mannitol, xylose, lactose and sorbitol (all from Becton Dickinson Bioxon, Querétaro México, prepared with phenol red, phenol red base broth BD Difco, Maryland EU). Identification was carried out following the standards of the Cowan and Steel bacterial identification manual (Barrow and Feltman, 2004).

Susceptibility to chemotherapeutics. The isolates were evaluated in different antibiotics, through the disk diffusion method (Humphries et al. 2018). It is briefly described below. 3 CFUs were selected from each isolation in pure culture, which were seeded in trypticasein soy broth (BD Difco, Maryland EU) and incubated at 37 ºC with shaking (200 rpm). The incubation time varied for each isolate, until obtaining an inoculum equivalent to the 0.5 McFarland standard (0.05 ml of 1% BaCl2 [Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri United States] and 9.95 ml of 1% H2SO4 [Sigma- Aldrich, St. Louis, Missouri United States]) of turbidity, corresponding to 1 to 2×106 CFU/ml in GP bacteria and 5 × 108 CFU/ml in GN bacteria. 1ml of each isolate was seeded on Müller-Hinton agar (MH, BD Difco, Marylando EU). The following sensidisks (Diagnostic Research; Mexico City, Mexico) were used: ampicillin (10 µg, Staphylococcus spp.: resistant phenotype (RF): <28 mm; susceptible phenotype (FS):> 29 mm; other bacterial genera: FR: <21 mm; FS:> 22 mm), Cephalothin (30 µg, FR: <14 mm, FS:> 15 mm), Cefotaxime (30 µg, FR: <14 mm, FS:> 15 mm) , ciprofloxacin (5 µg, RF: <15 mm, FS:> 16 mm), clindamycin (30 µg, RF:<14 mm, FS:> 15 mm), dicloxacillin (1 µg, RF: <10 mm) , FS:> 11 mm), erythromycin (15 µg, RF: <13 mm, FS:> 14 mm), gentamicin (10 µg, FR: <12 mm, FS:> 13 mm), penicillin (10 U , Staphylococcus spp .: FR: <28 mm, FS:> 29 mm, other genera GP: FR: <14 mm; FS:> 15 mm), sulfamethoxazole-trimethoprim (25 μg, FR: <10 mm, FS: > 11 mm), tetracycline (30 µg, FR: <14 mm, FS:> 15 mm), vancomycin (30 g, FR: <14 mm, FS:> 15 mm), chloramphenicol (30 µg, FR : <12 mm, FS:> 13 mm), Carbenicillin (100 µg, FR:<18 mm, FS:> 19 mm), Netilmicin (30 µg, FR: <12 mm, FS: > 13 mm), nitrofurantoin (300 µg, FR: <14 mm, FS:> 15 mm), norfloxacin (100 µg, FR: <18 mm, FS:> 19 mm) and amikacin (30 µg, FR : <14 mm, FS:> 15 mm). The chemotherapeutics clindamycin, dicloxacillin, erythromycin, penicillin, tetracycline, and vancomycin were tested only in GP isolates; whereas chloramphenicol, carbenicillin, netilmicin, nitrofurantoin, norfloxacin, and amikacin were tested only in GN isolates. The zones of inhibition in each sensidisc were measured with a ruler after 16 to 18 h of incubation at 37 ºC. Isolates with intermediate susceptibility were considered resistant, since these bacterial populations present subpopulations of resistant bacteria that will transmit this phenotype to susceptible bacteria (Hombach et al. 2013; Maurer et al. 2014).

Statistical analysis. The bacterial identification results of the different samples are presented through descriptive statistics and frequency tables. For the results of the chemotherapeutic susceptibility test, contingency tables were constructed with the chisquare test with a significance level of P <0.05 using the PROC FREQ procedure of the SAS program (2002, v9.0. SAS Institute Inc., Cary, NC., USA) to know the resistance percentages. Furthermore, an analysis of variance was performed in a generalized linear model using the PROC GLM and the least significant difference test (LSD, Fisher's exact test) for the comparison of the resistance profile between antibiotics with a P <0.05. For this analysis, the percentage values were converted into values in a range from 0 to 1.

 RESULTS

Bacterial isolation and identification. From the 51 samples, only 21 (41.2%) were positive to bacteriological isolation. From these 21 samples, 32 bacteria were isolated and identified (4).

Identification and frequency of bacteriological isolates from vaginal samples of goats.
Frequency
Gram-positive bacteria
Staphylococcus spp. 31.2% (10/32)
Aerococcus spp. 21.9% (7/32)
Corynebacterium jeikeium 15.6% (5/32)
Staphylococcus chromogenes 6.3% (2/32)
Corynebacterium renale 3.1% (1/32)
Staphylococcus xylosus 3.1% (1/32)
Streptococcus spp. 3.1% (1/32)
Gram-negative bacteria
Escherichia coli 15.6% (5/32)

Susceptibility to chemotherapeutics. In the analysis of the antimicrobial resistance profile for GP bacteria, it is noteworthy that all isolates were resistant to erythromycin and tetracycline (Table 2). Isolates of Staphylococcus spp. had a general percentage of resistance of 87.5% (χ2= 18.51, p = 0.0704), with penicillin being the antibiotic with the lowest resistance (70%). The two isolates of S. chromogenes had the lowest resistance among the tested antibiotics (70.8%), with no difference between them (χ2=16.73, p=0.1158). The isolates of C. renale, S. xylosus and Streptococcus spp., had resistance percentages of 83.3% (χ2= 12.0, p = 0.3636), 91.7% (χ2= 12.0, p = 0.3636) and 83.3% (χ2= 12.0, p = 0.3636), respectively. On the other hand, isolates of the genus Aerococcus spp. (resistance 80.9%) showed a lower resistance against dicloxacillin (28.6%, χ2= 22.85, p=0.0185), compared to the other antibiotics. Likewise, isolates of C. jeikeium showed a lower percentage of resistance to cefotaxime and ampicillin (20% and 40%, respectively χ2= 34.9, p <0.001) in contrast to the other antibiotics. For these bacteria the resistance was 85%. Under the conditions of this work, the GP isolates had a resistance profile of 83.2%.

Percentage of resistance in vaginal isolates of Creole goats
Bateria (n)% Chemotherapeutic
Gram + AMP CEF CFT CIP CLI DIC ERI GEN PEN STM TET VAN
Staphylococcus spp. (10) 37 80 90 100 80 90 80 100 80 70 100 100 100
Aerococcus spp. (7) 25.9 57.2 71.4 85.7 85.7 100 28.6 100 85.7 85.7 71.4 100 100
C. jeikeium (5) 18.5 40 100 20 100 100 100 100 100 100 100 100 60
S. chromogenes (2) 7.4 50 0 0 100 100 0 100 100 50 100 100 100
C. renale (1) 3.7 0 0 100 100 100 100 100 100 0 100 100 100 100
S. xylosus (1) 3.7 100 100 100 100 0 100 100 100 100 100 100 100
Streptococcus spp. (1) 3.7 100 100 100 100 100 0 100 100 0 100 100 100 100
Gram - AMP CEF CFT CIP CLO CAR NET GEN NIT NOT STM AMI
Escherichia coli (5) 100 100 100 100 100 60 100 100 100 100 80 100 100 100

AMP: ampicillin, CEF: cephalothin, CFT: cefotaxime, CIP: ciprofloxacin, CLI: clindamycin, DIC: dicloxacillin, ERI: erythromycin, GENE: gentamicin, PEN: penicillin, STM: sulfamethoxazole-trimethroprim, TET: tetracycline, VAN: vancomycin, CLO: chloramphenicol, CAR: carbenicillin, NET: netilmicin, NIT: nitrofurantoin, NOT: norfloxacin and AMI: amikacin.

For Enterobacteriaceae (GN isolates) the general percentage of resistance was 95%, most of the antibiotics tested had a resistance of 100%, with the exception of ciprofloxacin (60%) and nitrofurantoin (80%), whose resistance was less than rest of antibiotics (p <0.05, Table 3).

Comparison of the resistance pattern between antibiotics
Bacteria Chemotherapeutic
AMP CEF CFT CIP CLI DIC ERI GEN PEN STM TET VAN SEM
(P)
Gram + 0.63cd 0.81abc 0.77cd 0.85ab 0.93ab 0.59d 1.0a 0.81abc 0.81abc 0.93ab 1.0a 0.93ab 0.124
(0.0001)
AMI AMP CAR CEF CFT CIP CLO GEN NET NIT NOT STM SEM
(P)
Gram - 1.0a 1.0a 1.0a 1.0a 1.0a 0.6b 1.0a 1.0a 1.0a 0.8b 1.0a 1.0a 0.002
(0.05)

AMP: ampicillin, CEF: cephalothin, CFT: cefotaxime, CIP: ciprofloxacin, CLI: clindamycin, DIC: dicloxacillin, ERI: erythromycin, GENE: gentamicin, PEN: penicillin, STM: sulfamethoxazole-trimethroprim, TET: tetracycline, VAN: vancomycin, CLO: chloramphenicol, CAR: carbenicillin, NET: netilmicin, NIT: nitrofurantoin, NOT: norfloxacin and AMI: amikacin. SEM: standard error of the mean. Mean values with the same superscript are not significantly different. The percentage data were transformed to be analyzed through Fisher's exact test.

The comparison between the resistance profiles shows that dicloxacillin was more effective among GP bacteria (0.59, Table 3), similar to the resistance profile of ampicillin (0.63) and cefotaxime (0.77). The overall average resistance for antibiotics tested against GP bacteria was 0.84, while the overall average resistance for antibiotics tested against GN bacteria was 0.95.

 DISCUSSION Bacterial isolation and identification.

The environmental conditions of the VM of ruminants favor the development of a microbiota in accordance with the physiological development. This population does not allow, in general, the development of pathogenic or saprophytic microorganisms (Otero et al., 2000). The compromise of the integrity of the vaginal mucosa, as well as the alterations of the microbiota, can trigger ascending infections of the urogenital tract, putting at risk the reproductive health of goats (Ababneh and Degefa, 2006), cows (Otero et al., 2000) and sheep (Sargison et al., 2007).

From the vaginal swabs, 41.2% of the samples showed bacteriological growth. Manes et al., 2013 reported 52% of positive samples to isolation in Saanen goats in reproductive stage, while Penna et al., 2013 reported 77% of positive samples in Saanen goats in conditions of gestational anestrus. On the other hand, Oliveira et al., 2013 reported 100% bacterial isolation in anéstric Toggenbourgh goats, while Ababneh and Degfa 2006 reported 75% isolation in postpartum Baladi goats. These different results indicate the high variability of the bacterial isolation that can be due to race, reproductive status and physiological status. This research shows that, in creole goats, without an apparent definition of reproductive seasonality, the isolation of the aerobic bacterial microbiota is not greater than 50%. More studies are required to link physiological status and racial profiling with bacteriological isolation.

In this study it is shown that the predominant aerobic bacterial population in healthy creole goats was GP bacteria (84.4%) and to a lesser extent GN bacteria (15.6%). Various studies agree with our results. Manes et al., 2013 isolated 77% of GP bacteria in Saanen goats before vaginal sponge insertion with 60 mg of medroxyprogesterone acetate for oestrus synchronization; while Penna et al., 2013 isolated 71.3% of GP bacteria, being coagulase negative Staphylococcus (CoNS) the main bacteria isolated. This finding coincides with our work, since the largest number of isolated bacteria belonged to the genus Staphylococcus spp. (31.2%), coupled with the isolation of S. chromogenes (6.3%) and S. xylosus (3.1%). Oliveira et al., 2013 also isolated Staphylococcus spp. in 63.6% of vaginal swabs in anestric goats. These findings may indicate that the genus Staphylococcus is a primary inhabitant of VM in goats. The presence of vaginitis has not been reported in these animals associated with this bacterial genus (Oliveira et al. 2013), as occurs in other species (Deng et al., 2019; Shea et al., 2019), indicating that in these hosts can be opportunistic pathogens.

The second bacterial group isolated from vaginal swabs was Aerococcus spp. with a percentage of 21.9%. This GP bacterium has been associated with opportunistic urinary infections in cattle (Liu et al., 2019). Its presence has previously been reported in the vaginal mucosa of goats, without signs of infection (Meekins et al., 2017). This could indicate that, like Staphyloccocus spp, the Aerococcus genus is a normal inhabitant of the vaginal mucosa in goats.

In proportion, the isolates of C. jeikeium and E. coli were similar (15.6%). C. jeikeium, bacillus GP, has been related to subclinical mastitis in sheep (Queiroga, 2017). There are no reports of the presence of this bacillus in goats, and based on the frequency of isolations of this bacterium in this study, it is likely that it is part of the native VM of Creole goats in northeastern Mexico. In contrast, E. coli is a widely distributed enterobacterium, it is the main bacterium that is part of the intestinal microbiota in domestic animals (except birds). The isolation of this Enterobacteriaceae from anatomical regions outside the intestine is related to pathogenic and opportunistic infections (Gyles and Fairbrother, 2010). In ruminants it has been linked as a cause of abortion and urogenital infections (Sargison et al., 2007). In goats this enterobacterium has been reported both in the absence of vaginitis and in inflammatory processes (Martins et al., 2009; Oliveira et al., 2013). The presence of E. coli in this work may therefore suggest opportunistic colonization.

Isolation of C. renale may represent an incidental finding, since it has not been previously reported as part of VM in goats. However, this organism can cause various urinary infections in goats and sheep, although it is rare (Moore et al., 2010). Additionally, it has been isolated in clinically healthy cows, behaving as an opportunistic pathogen, producing cystitis, urethritis and pyelonephritis (Yeruham et al., 2006), due to its environmental adaptability (Moore et al., 2010). The isolation of C. renale in the vaginal mucosa of Creole goats can, like E. coli, represent the colonization of an opportunistic bacterium.

Finally, Streptococcus spp. it was found in a low proportion (3.1%), compared to the other GP cocci. Penna et al., 2013 reported the isolation of these agents in 51.1% in vaginal swabs, before inserting the vaginal sponge, indicating that these bacteria are part of the VM. On the other hand, this bacterial genus has been widely related as a goat pathogen producing mastitis (Steward et al., 2017). The presence of vaginitis or urinary tract infections due to Streptococcus spp. species has not been reported. It is likely that the finding in this work evidently corresponds to VM, as suggested by Penna et al., 2013.

 Susceptibility to chemotherapy

In this work, different antibiotic susceptibility profiles were shown, both for GP and GN bacteria. The difference in susceptibility between these two bacterial groups (83.2% of GP versus 95% of GN) must be taken with reserve, since in the GN bacteria they were isolated in lesser quantity from the swabs. However, it is worth noting the high resistance of the isolates to the action of antibiotics, considering that these are part of the VM, and that therefore, they have not been extensively subjected to antibiotic therapy.

From the antibiotics tested, erythromycin and tetracycline were shown to be completely ineffective against the GP isolates, whereas all the antibiotics tested against GN were ineffective, except for ciprofloxacin and nitrofurantoin. In this regard, Oliveira et al., 2013 and Penna et al., 2013 consider that the unrestricted use of antibiotics in the promotion of growth, as well as in the treatment of young animals for diarrheal and respiratory diseases, can predispose to the spread of resistance, as has been evidenced for GN bacilli (Moghaddam et al., 2015).

From the resistance profile in GP, S. chromogenes, S. xylosus, C. renale and Streptococcus spp., were shown to be completely susceptible to at least one antibiotic. Additionally, the isolates of the genus Aerococcus and C. jeikum showed the highest susceptibility tested to dicloxacillin and to cefotaxime and ampicillin, respectively. From these drugs, only ampicillin has been reported to be highly effective against bacterial isolates (mainly against Staphylococcus spp) from the vaginal mucosa, with percentages of 50 to 100% (Suárez et al., 2006; Martins et al., 2009; Oliveira et al., 2013; Manes et al., 2013) which highlights the effectiveness of this antibiotic for the treatment of vaginitis whose etiology is GP bacteria. On the other hand, the main etiology of bacterial vaginitis in small ruminants are coliform bacteria (Ababneh and Degefa, 2006; Martins et al., 2009; Oliveira et al., 2013). In relation to this, in the E. coli isolates, only ciprofloxacin showed the lowest percentage of resistance (60%). In this regard, Oliveira et al., 2013 showed that ciprofloxacin was 100% effective in the control of E. coli isolates, from vaginal isolates of goats. In the same way that Martins et al., 2009 showed 100% effectiveness in coliform bacteria from vaginal isolates of sheep. This can demonstrate the speed with which E. coli can develop resistance to ciprofloxacin, so it is very important to raise awareness among both producers and veterinary clinicians in the responsible use of antibiotics.

 CONCLUSION

The aerobic VM of the Creole goats of Jaumave municipality, Tamaulipas is composed mainly of GP bacteria (population represented mainly by the genus Staphylococcus spp) and to a lesser extent by GN bacteria (Escherichia coli). The bacteriological isolation of the vaginal swabs represented 41.2% of the samples, indicating that other types of bacteria (nutritionally demanding) could be part of the VM. The aerobic VM GP found proved to be highly resistant to erythromycin, tetracycline and vancomycin, while the GN isolates were resistant to most of the chemotherapeutics evaluated, except for cryprofloxacin and nitrofurantoin (with a resistance profile of 60% and 80%, respectively). The high percentage of resistance found in this work highlights the importance of a responsible use of antibiotics in extensive goat production.

 ACKNOWLEDGMENT

To the project SAGARPA CONACYT 2017-02-291311 “Development and transfer of diagnostic tests for lentiviruses and abortion-causing microorganisms: Chlamydia spp., Brucella melitensis, Leptospira spp. and Coxiella burnetti, in sheep and goats”. Faculty of Veterinary Medicine and Zootechnics of the Autonomous University of Tamaulipas, the Diagnostic Laboratory of the FMVZ-UAT and the technical-administrative staff.