aa Abanico agroforestal Abanico agro 2594-1992 Sergio Martínez González 00105 10.37114/abaagrof/2021.6 Artículos originales Efecto del ácido linoleico conjugado sobre la calidad de la carne de conejas 0000-0001-6133-8804 Regules-Rivera Hebert 1 0000-0001-6222-3259 González-Montiel Lucio 2 0000-0001-7575-8180 Hernández-Bautista Jorge 3 0000-0002-1993-7675 Ramírez-Ordoñes Sergio 4 0000-0003-1727-8183 Aguilera-Morales Martha 4 0000-0003-1837-1988 Antonio-Cisneros Cynthia * 4 Universidad para el Bienestar Benito Juárez García. San Juan Bautista Cuicatlán Oaxaca. Universidad para el Bienestar Benito Juárez García Cuicatlán Oaxaca Universidad de la Cañada. Teotitlán de Flores Magón, Oaxaca. Universidad de la Cañada Universidad de la Cañada Oaxaca Mexico Universidad Autónoma Benito Juárez Oaxaca. Universidad Autónoma Benito Juárez Oaxaca Universidad del Papaloapan, campus Tuxtepec y Loma Bonita. Oaxaca. Universidad del Papaloapan Universidad del Papaloapan Oaxaca Mexico *Autor responsable y de correspondencia: Antonio-Cisneros Cynthia. Circuito central # 200. Colonia parque industrial, cp. 68301. Tuxtepec, Oaxaca. México. hebert.regulesrivera@gmail.com, luciogonzalez@unpa.edu.mx, jorgebuajo@gmail.com, mvzsramirez@mail.com, aguilena02@hotmail.com, cynthiamagalyac@gmail.com.mx. 28 02 2022 Jan-Dec 2021 3 e202122 12 04 2021 27 09 2021 Este es un artículo publicado en acceso abierto bajo una licencia Creative Commons RESUMEN

El uso de ácidos grasos en suplementos para animales de consumo humano es para mejorar la salud del animal y disminuir el uso de medicamentos. El CLA es un compuesto bioactivo y se puede incorporar en la dieta de animales no rumiantes. El objetivo de este experimento fue evaluar el efecto de la incorporación de CLA en la dieta de conejas Nueva Zelanda, sobre la calidad de la carne. Las variables evaluadas fueron la calidad microbiológica de cecótrofos: carga microbiana de BAL, enterobacterias y clostridium spp., los parámetros zootécnicos y la calidad fisicoquímica de la carne de conejas al sacrificio. Los resultados obtenidos mostraron presencia de BAL y Clostridium y ausencia de Enterobacterias durante el tiempo del estudio. El análisis proximal de la carne de conejas no mostró diferencia (p > 0.05) en el peso vivo (PV), ganancia de peso (GP), eficiencia alimenticia (EA) y conversión alimenticia (CA) en los tratamientos y el testigo. Pero la CRA y el color mostraron diferencia (p ≤ 0.05) entre los músculos LD y BF. El perfil de AG mostró la presencia de CLA en el muslo de las conejas.

 Palabras clave: CLA conejas CRA cecótrofos pH color PRODEP PROMEP/103.5/13/7556 INTRODUCCIÓN

El término CLA, por sus siglas en inglés, describe los isómeros geométricos y posicionales del ácido linoleico C18:2 que contiene dobles enlaces en configuración cis o trans a lo largo de la cadena de 18 carbonos. El resultado de la biohidrogenación microbiana del C18:2 y linolénico C18:3 es la formación de 28 isómeros posibles, donde los isómeros cis-9, trans-11 y trans-10, cis-12 son los más activos en cáncer, obesidad, inflamación, diabetes y aterosclerosis (Castro-Webb et al., 2012; Yang et al., 2015; Jelińska et al., 2017). Los alimentos agropecuarios con CLA son la leche, carne y subproductos derivado de estos; la eficiencia de la producción y la calidad de la carne puede mejorarse al incluir CLA en la dieta de las especies pecuarias. Esta concentración depende de factores ante y posmorten, es decir, raza, clima, salud intestinal, tipo de producción, tipo de músculo y materias primas.

La carne de conejo se considera un alimento funcional (Dalle Zotte & Szendrő, 2011), porque el consumo regular puede proporcionar compuestos bioactivos: vitaminas y minerales, antioxidantes y AG como el CLA. Los conejos son una especie pequeña con ventajas como las técnicas de crianza, factores biológicos como edad y peso, efectos genéticos y de raza y procesos tecnológicos de transformación de carne que no tienen especies mayores como las aves de corral, cerdos y bovinos. El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto del CLA en la dieta de conejas Nueva Zelanda sobre la calidad de la carne.

 MATERIAL Y MÉTODOS Condiciones experimentales

Las conejas Nueva Zelanda (n=15) se adquirieron en la granja cunícola UNAM, México, y trasladadas vía terrestre hasta la posta zootécnica de la Universidad del Papaloapan, campus Loma Bonita, Oaxaca. El estudio se dividió en dos etapas: la etapa con probiótico y la etapa con CLA. Las hembras recién destetadas (30 d) presentaron fecha de nacimiento y peso similar (762 ± 50.9 g). La población se dividió en dos grupos experimentales: testigo (T) y tratamiento probiótico (P), alojadas en jaulas dobles, de malla galvanizada cuyas dimensiones fueron 90x60x40 cm. Los dos grupos: T y P fueron alimentados ad libitum con alimento base comercial (Conejina TurboMR, Purina, México) pero al grupo P se le administró probiótico BioPlus 2B® (Chr. Hansen BioSystems A/S, Denmark), la etapa de probiótico duró seis semanas. Después, en la etapa de CLA (séptima semana), la población fue dividida en tres grupos: testigo (T), tratamiento 1 (T1) y tratamiento 2 (T2), con cinco conejas cada uno. Las hembras fueron distribuidas para controlar ruidos experimentales y que permitieran la coincidencia de características como edad, peso vivo, genotipo, origen (misma granja) y manejo.

 Dietas experimentales

Los tres grupos se alimentaron con una dieta a base de cereales, minerales y aceites esenciales (Cuadro 1), pero diferente contenido de CLA (Corino et al., 2003). Las dietas se prepararon a mano, sin peletizado ni extrusión.

Ingredientes empleados en las dietas para conejas
Ingrediente, (g) T T1 T2
Alfalfa heno 52 52 52
Maíz molido 18 18 18
Pasta de soya 12 12 12
Avena 9 9 9
Salvado de trigo 5 5 5
Sales y minerales 1.5 1.5 1.5
Aceite de canola 1.5 1.1 0.7
Metionina sintética 0.5 0.5 0.5
CLA 0 0.4 0.8

T= sin CLA; T1= 0.4 g CLA kg-1; T2 = 0.8 g CLA kg-1 . Proteína: 20.5±0.9 %, EE: 2.8±0.1%, Ceniza: 6±0.1% y Fibra cruda: 19±0.8%

El CLA fue adquirido del proveedor GNC® presentación en frasco de 90 cápsulas de 1.6 g, cada una con 55 mg de CLA. Cada ración contenía CLA administrado en dilución acuosa con 20 mL de agua destilada. La aplicación fue después de preparar la ración completa y por atomización manual. El tiempo que duró la segunda etapa fue de seis semanas y el tiempo total 12 semanas.

 Calidad microbiológica

Las heces blandas (cecótrofos) fueron analizadas como parte del comportamiento alimentario normal en T y P. El estudio microbiológico comprendió el conteo de tres grupos microbianos: bacterias acidolácticas (BAL), enterobacterias y clostridium. El procedimiento para la toma, manejo, transporte, preparación y dilución de las muestras se llevó a cabo de acuerdo a Linaje et al., (2004). La identificación de BAL se realizó sobre Agar MRS, las enterobaterias con Agar MacConkey y para clostridium se utilizó Agar Reinforced Clostridial. Los medios de cultivos fueron preparados de acuerdo a las especificaciones del proveedor Fluka Analytical©, Suiza. Durante la recolección de los cecótrofos se utilizaron pinzas, guantes y tubos de ensayo estériles, fueron trasladados al laboratorio de análisis químico y almacenados en congelación a -18°C.

El tratamiento de 1g de muestra de cecótrofos se transfirió a bolsas estériles para Stomacher, el agua peptonada estéril al 0.1% (1g de peptona, 8.5 g de NaCl en 1000 mL de agua) se adicionó hasta obtener una dilución 1:10, la mezcla se homogenizó durante 1-2 min. Las alícuotas apropiadas de las diluciones se tomaron de tubos de ensayo con agua peptonada estéril al 0.1%. El análisis se realizó por triplicado y las colonias se contaron después del tiempo de incubación. El criterio utilizado en la selección de las cajas fue de 30 y 300 colonias. Los recuentos obtenidos se expresaron como Log10 de UFC g-1.

 Parámetros zootécnicos

El peso vivo (PV) de las conejas se registró por las mañanas semanalmente, durante el tiempo que duró el experimento y antes de suministrar la dieta experimental. La eficiencia alimenticia (EA), se determinó con la expresión 1. En la práctica, el inverso de esta relación es conocida como conversión alimenticia (CA) calculada con la expresión 2 y se usa en la crianza de animales para referirse a la conversión de alimento en ganancia de peso. En todos los casos el peso se obtuvo con una báscula multifuncional Torrey©, México, modelo LPCR.

E A = ( a u m e n t o   d e   p e s o   d i a r i o p r o m e d i o a l i m e n t a c i ó n d i a r i a   p r o m e d i o )

C A = ( 1 / E A )

Estas expresiones son indicadores de nutrición, la primera mide la eficiencia biológica, mientas que la segunda es una medida económica de alimentación. Los animales con un valor de CA bajo tienden a ser más eficientes, (Gaillard et al., 2020), sin embargo, son diferentes dependiendo de la especie, la genética, estado de salud, prácticas de alimentación y condiciones ambientales. Por otro lado, las conejas fueron insensibilizadas y sacrificadas de acuerdos a la NOM-033-SSA1, en el interior del laboratorio químico- biológico de la universidad. La canal de conejas fue congelada después del sacrificio a 5°C hasta su análisis posterior. El peso vivo (PV) se registró antes del sacrificio, el peso de la canal fría (CF) y despojos (D) que corresponden a vísceras, patas, cabeza y cola se obtuvieron después del sacrificio. La ganancia de peso se obtuvo por diferencia mientras que, la grasa perirenal (GPR) e interescapular (GI) se obtuvieron del área de los riñones y la sección vertebral externa respectivamente. Para todas las determinaciones se utilizó una balanza granataria marca Ohaus© modelo CS-5000.

 Calidad fisicoquímica

La calidad fisicoquímica se analizó después del sacrificio y a las 24 h posmorten en canales procedentes de dos músculos diferentes; longissimus dorsis (LD) y bíceps femoris (BF). El análisis proximal materia seca (MS), humedad (H), cenizas (C), extracto etéreo (EE) y proteína bruta (PB) (AOAC, 1990) se llevó a cabo por triplicado. El potencial de hidrógeno (pH) se analizó con un medidor de pH Orion Star A211, Thermo Scientific de acuerdo a la NOM-317-S-1978. La saturación de color (*a, *b y *L), se analizó utilizando un colorímetro UltraScan® Vis (HunterLab, H unter Associates Laboratory Inc., Hills Road, Reston, Virginia USA). La lectura de color se determinó en ambos músculos, en la zona visible de (400 a 700 nm). La capacidad de retención de agua (CRA), se analizó utilizando NaCl 0.6 M como solución añadida, la muestra se dejó reposar por 30 min y se centrifugó a 3000 rpm durante 15 min. El sobrenadante se cuantificó como porcentaje de agua retenido en la muestra. El perfil de AG, se cuantificó con una extracción sólido-líquido y una mezcla cloroformo-metanol 2:1 v/v, (Figueiredo et al., 2016). La solución fue analizada por cromatografía de gases (CG) con un cromatógrafo HP equipado con detector de ionización de flama y una columna capilar SupelcoWax-10 de 100 m x 0.25 mm de diámetro y un espesor de película de 0.2µm. Los resultados obtenidos fueron expresados en % de AG.

 Análisis estadístico

Los datos obtenidos fueron normalizados y analizados mediante un análisis de varianza y una comparación de medias de Tukey con un nivel de significancia p≤0.05.

 RESULTADOS Calidad microbiológica

El recuento promedio de BAL durante el tiempo que duró el experimento fue 8.27 + 0.72 UFC g-1 y 8.37 + 0.62 UFC g-1 para T y P, respectivamente. La Figura 1 muestra el comportamiento de BAL e indican que existe una diferencia entre los dos grupos.

Cuantificación de BAL en cecotrofos de conejas durante 6 semanas

El promedio de las enterobacterias en T fue 6.64 ± 1.85 Log10 UFC g-1 y para P no hubo crecimiento de este grupo bacteriano, incluso desde el primer muestreo. Finalmente, el recuento de Clostridium spp., fue de 8.31±0.87 UFC g-1 y 8.39±0.60 UFC g-1 para T y P, respectivamente.

 Parámetros zootécnicos

El PV de las conejas es mayor en T comparado con T1 y T2 a pesar de que GP es la misma para todos los grupos (Cuadro 2). El peso de CF se obtiene después del sacrificio y se observó que T1>T>T2 y es consistente con D donde se muestra que T1 y T2 representan una cantidad mayor de despojos (piel, patas y cola), que también pueden ser aprovechados como subproductos (artesanías locales). Las vísceras, sangre y órganos pueden transformarse en harina, ingrediente de alimento para animales. La relación de EA es la misma en T1 y T2 y CA presenta un valor de 2.2 y 2.1 respectivamente.

Parámetros zootécnicos de conejas suplementadas con CLA
Variable T T1 T2 ±
PV (kg) 2.1 2.4 2.3 1.4
GP, (kg) 1.1 1.1 1.1 0.01
CF (kg) 1.2 1.3 1.0 0.05
D (kg) 0.9 1.1 1.3 0.05
EA 0.3 0.2 0.2 0.01
CA 2.0 2.2 2.1 0.03
GPR (g) 4.8 8.8 9.5 2.5
GI (g) 1.0 2.8 2.2 0.9

T=sin CLA, T1=0.4 g CLA kg-1, T2=0.8 g CLA kg-1. PV=peso vivo, CF=canal fría, D=despojos, CA=conversión alimenticia, EA=eficiencia alimenticia, GP=ganancia de peso, GPR=grasa perirrenal, GI=grasa interescapular, DE=desviación estándar.

Finalmente, los valores de GPR son diferentes tanto en los tratamientos como en T y este comportamiento se presenta en los valores de GI.

 Calidad fisicoquímica

La composición química proximal se muestra en el Cuadro 3, el contenido de H es de 74- 73%, similar a lo reportado por la FAO, el cual reporta 74.9% en carne de conejo. La MS, por tanto, presentó el contenido más alto del análisis proximal (25-26%). El contenido de C representa los minerales, es decir, los iones esenciales para el humano; éste fue diferente únicamente cuando se comparó por tratamiento (Cuadro 3).

Composición proximal en carne de coneja suplementadas con CLA
% T T1 T2 EEM Prob LD BF EEM Prob
MS 25.66 26.33 25.84 0.410 NS 25.94 25.95 0.335 NS
P 22.44 23.07 23.06 0.396 NS 22.51 22.52 0.373 NS
C 1.37ab 1.29a 1.47b 0.038 0.005 1.38 1.39 0.031 NS
EE 1.27 1.30 1.17 0.208 NS 1.23 1.24 0.170 NS

Testigo =sin CLA, T1=0.4 gCLA Kg-1, T2=0.8 gCLA Kg-1. LD= Longissimus dorsis, BF= Biceps femoris. Los valores presentan el promedio ±SEM. abcd, letras diferentes en cada columna indican diferencia significativa (p≤0.05). EEM=error estándar de la media, NS= no significativo.

Los parámetros de calidad tecnológica de la carne se muestran en el Cuadro 4, la CRA cambia durante el tiempo posmorten y baja a medida que se llega a la maduración de la carne. Se observó que existe diferencia estadística entre tratamientos (T1 y T2) y músculos (LD y BF) después de 1 y 24 h de sacrificio. La CRA es un parámetro que depende del pH el cual provoca la pérdida de humedad, el cambio de textura, el aumento de la terneza y la diferencia de color. El cambio de pH hacia valores ácidos, está asociado al proceso irreversible de contracción muscular a nivel de las cadenas de actina-miosina y por la producción de ácido láctico que disminuye el pH hasta 5.4. El valor de pH en este estudio, muestra cambios significativos solo entre tratamientos (T1 y T2) después de 1 y 24 h de sacrificio. Los factores asociados con los cambios en CRA y pH son la producción de ácido láctico y por lo tanto la disminución de pH, el consumo de glucógeno en el músculo, la disminución de compuestos energéticos (ADP y ATP) que inician la rigidez cadavérica y, por lo tanto, la desnaturalización de proteínas.

El color está asociado con el estado físico (b*), químico (a*) y el contenido de hemoglobina (L*). En todos los casos el parámetro L>b>a (Cuadro 4). El parámetro L* asociado con el contenido de hemoglobina. fue el único parámetro que no presentó diferencia significativa cuando se analizaron los resultados por tratamientos (T1 y T2) y por tipo de músculo (LD y BF). Lo anterior es importante debido a que el color no se ve afectado por las dietas probadas y tampoco cuando este análisis se realiza en dos músculos comerciales diferentes. El parámetro b* fue diferente estadísticamente cuando fue comparado por tratamientos (T1 y T2) mientras que a* no fue diferente cuando se evaluaron los resultados en ambas condiciones.

Parámetros de calidad tecnológica de la carne conejas suplementadas con CLA
% T T1 T2 EEM Prob LD BF EEM Prob
CRA1h 18.65ab 19.08b 17.53a 0.501 0.04 17.79 19.04 0.409 0.05
CRA24h 9.36b 8.88a 8.86a 0.150 0.04 8.43 9.64 0.123 0.01
pH1h 6.42 6.42 6.52 0.050 NS 6.84 6.07 0.041 0.01
pH24h 5.94 5.98 5.96 0.065 NS 6.29 5.66 0.053 0.01
Color24h
L* 62.44 60.36 62.19 0.976 NS 60.96 62.36 0.797 NS
b* 12.30 12.37 11.86 0.664 NS 10.31 14.04 0.542 0.01
a* -0.05a -0.28ab -0.57b 0.176 0.05 -2.82 2.22 0.144 0.01

Testigo =sin CLA, T1=0.4 gCLA Kg-1, T2=0.8 gCLA Kg-1. LD= Longissimus dorsis, BF= Biceps femoris. CRA= capacidad de retención de agua, L*=luminosidad, a*=rojo, b*=amarillo. Los valores presentan el promedio ±SEM. abcd, letras diferentes en cada columna indican diferencia significativa (p≤0.05). NS= no significativo.

 Perfil de ácidos grasos

Por otro lado, el perfil de AG se muestra en el Cuadro 5, se observa que la composición en la carne de coneja procedente del músculo LD fue 18:1>C14:0>C16:0>AGPI, presentando diferencia significativa únicamente en el AG C18:1 entre los tratamientos probados. Mientras que el músculo BF la composición fue C18:2>C18:1>C16:0>C18:2, c9t11>C18:2, c12t10>C14:0.

Perfil de AG en carne de conejas suplementadas con CLA
Longissimus dorsis Biceps femoris
T T1 T2 T T1 T2 EEM
C14:0 21.4b 23.91c 23.50c sd sd sd 0.55
C16:0 8.49a 9.12a 8.73a 11.38b 21.79d 20.10c 0.41
C18:1 27.16de 24.40bc 28.13e 13.92a 25.78cd 24.08b 0.52
C18:2 sd sd sd 16.51b 25.84c 26.94c 0.62
C18:2, c9t11 sd sd sd sd 0.487b 0.710c 0.03
C18:2, c12t10 sd sd sd 5.3b sd sd 0.06

Testigo=sin CLA, T1=0.4 gCLA kg-1, T2=0.8 gCLA kg-1. Los valores presentan el promedio ±SEM, abcd, letras diferentes en cada columna indican diferencia significativa (p ≤ 0.05), sd=sin detectar.

 DISCUSIÓN

Latorre et al., (2014) evaluaron la persistencia de esporas de Bacillus subtilis, un tipo de BAL, a través del tracto gastrointestinal (TGI), los resultados mostraron que aproximadamente el 90% de las esporas germinan en el TGI. Los cambios relacionados con las diferentes condiciones fisiológicas, nutricionales y microbiológicas pueden ser comparadas con BAL, éstas tienen la capacidad para germinar a nivel TGI y sobrevivir en el ambiente probado, tal como se aprecia en la Figura 1. El incremento de las BAL en este estudio, durante las semanas 4 y 6 permite inferir en un posible aumento de la producción de sustancias antimicrobianas que ayudan a la salud del TGI del conejo. La administración de probiótico cumple la función de prevenir o retardar la aparición de enfermedades gastrointestinales y los conejos que consumieron probiótico en la dieta mostraron condición de salud adecuadas (Gaggia et al., 2010). La bacteria E. coli pertenece a la familia de enterobacterias y su presencia está asociada a la diarrea en animales recién destetados y la sustitución de los antibióticos en la dieta. Las características zootécnicas pueden mejorar significativamente debido al desarrollo y el mantenimiento de la microbiota cecal que promueve el estado de salud de los animales. Los probióticos Saccharomyces cerevisiae y Enterococcus faecilum fueron administrados oralmente durante dos semanas en conejos sanos; el tratamiento no afectó los niveles fecales de especies de bacteroides, fibrobacter succinogenes o clostridium spiroforme, (Summa & Brandao, 2017).

Los parámetros de calidad tecnológica de las carnes, pH, CRA y color demostraron cambios esperados mientras que los parámetros zootécnicos fueron bajos a los reportados por Palma & Hurtado (2009), ellos alimentaron gazapos machos durante 60 d con una dieta combinada de alimento comercial (AC) y mango criollo fresco (MC), la CA fue de 2.41 a 2.13 en dietas con 60 y 40 g de AC y 60 y 80 g de MC. En otro estudio, (Corino et al., 2003) encontraron que los animales suplementados con CLA no obtuvieron diferencias significativas en los parámetros productivos. Pérez-Martínez et. al., (2018) evaluaron parámetros productivos en conejos alimentados con diferentes partes de la planta Tithonia tubaeformis, ellos no encontraron diferencia significativa en las variables medidas, sin embargo, la CA fue de 3.18 a 3.41. dichos resultados son similares a lo reportado por Meineri et al., (2010) y Dalle Zotte & Szendro (2011).

Malavé (2013), reportó que la suplementación alimenticia de diferentes animales no afecto significativamente la composición química proximal, resultados consistentes con este estudio donde se observó diferencia únicamente en el contenido de T (1.47-1.29%). Estos resultados indican la presencia de CLA, cis-9, trans-11, en la carne procedente del músculo BF en ambos tratamientos y es mayor en T2, es decir, cuando las conejas son alimentadas con 0.8 gCLA Kg-1. Corino et al., (2003) determinaron el perfil de AG en Longissimus lumborum en conejos suplementados con 0.5% CLA y obtuvieron 20% de C18:1, 29% de C18:2n6 y 25% de C16:0. En otro estudio, se reportó la proporción relativa de diferentes tipos de AG en LD, alcanzando 38% de AG saturados, 28% de AG monoinsaturados y 32% de AG poli-insaturados. Estas proporciones de AG permiten comparar la carne de conejo con otras especies como el cerdo, pollo, ternero y res (Dalle Zotte & Szendrő, 2011). Sin embargo, la carne de conejo tiene características funcionales como bajo contenido de colesterol, alto contenido de proteína y aminoácidos esenciales; especialmente en LD, digestibilidad alta y niveles altos de AG poli-insaturados que permite considerarlo como un alimento funcional con propiedades nutricionales y dietéticas (Dalle & Szendrő, 2011).

 CONCLUSIONES

La calidad de la carne depende de varios parámetros, en este estudio se analizó la dieta enriquecida con CLA sobre la calidad microbiológica, productiva y fisicoquímica. La calidad microbiológica indicó que las BAL están presentes durante el tiempo que duro el estudio (seis semanas) y es suficiente para inhibir a las enterobacterias. El comportamiento es importante considerando que en las primeras semanas de vida se adquiere inmunidad ante la presencia de diversos patógenos que dañan la salud del animal. El peso comercial se alcanzó en 80 d de alimentación con una CA baja y un rendimiento de la canal de acuerdo a lo esperado. La calidad productiva no se afecta cuando se suministran dos dietas diferentes, sin embargo, la evaluación de la calidad fisicoquímica de la carne, indicó que la CRA es el parámetro afectado en la evaluación y es reflejado en el estado fisicoquímico de la hemoglobina. El perfil de AG demostró que los AGS no cambian por el tipo de músculo y se demostró la presencia de CLA al menos en el músculo BF. Lo anterior puede emplearse para considerar la carne de BF o muslo, una fuente alternativa de CLA.

 AGRADECIMIENTOS

Este estudio fue financiado por PRODEP con número de registro PROMEP/103.5/13/7556. Se agradece al Instituto Tecnológico de México, campus Tuxtepec por las facilidades proporcionadas en la realización del análisis cromatográfico. El estudio de la calidad microbiológica se realizó en la Universidad de la Cañada y el estudio de calidad productiva y fisicoquímica en la Universidad del Papaloapan, campus Loma Bonita. Se agradece por su colaboración a Javier Vázquez Roble y José Espinoza Azamar.

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Clave:2021-22

 Original articles Effect of conjugated linoleic acid on quality of rabbit meat ABSTRACT

The use of fatty acids in food animal supplements is to improve animal health and decrease the use of medications. CLA is a bioactive compound and can be incorporated into the diet of non-ruminant animals. The objective of this experiment was to evaluate the effect of incorporating CLA into the diet of New Zealand rabbits on meat quality. The variables evaluated were the microbiological quality of cecotrophs: microbial load of LAB, enterobacteria and Clostridium spp., zootechnical parameters and physicochemical quality of meat from rabbits at slaughter. The results obtained showed the presence of LAB and Clostridium and the absence of Enterobacteriaceae during the study period. Proximal analysis of rabbit meat showed no difference (p > 0.05) in live weight (LW), weight gain (WG), feed efficiency (FE) and feed conversion ratio (FCR) in the treatments and the control. But WRC and color showed difference (p≤0.05) between LD and BF muscles. The FA profile showed the presence of CLA in the thigh of rabbits.

 Keywords: CLA rabbits WRC cecotrophs pH color INTRODUCTION

The term CLA describes the geometric and positional isomers of C18:2 linoleic acid containing double bonds in cis or trans configuration along the 18-carbon chain. The result of microbial biohydrogenation of C18:2 and C18:3 linolenic is the formation of 28 possible isomers, where cis-9, trans-11 and trans-10, cis-12 isomers are the most active in cancer, obesity, inflammation, diabetes and atherosclerosis (Castro-Webb et al., 2012; Yang et al., 2015; Jelińska et al., 2017). Agricultural feeds with CLA are milk, meat and by-products derived from these; production efficiency and meat quality can be improved by including CLA in the diet of livestock species. This concentration depends on ante- and post-mortem factors, i.e., breed, climate, intestinal health, type of production, type of muscle and raw materials.

Rabbit meat is considered a functional food (Dalle Zotte & Szendrő, 2011), because regular consumption can provide bioactive compounds: vitamins and minerals, antioxidants and FAs such as CLA. Rabbits are a small species with advantages such as breeding techniques, biological factors such as age and weight, genetic and breed effects and technological processes for meat processing that larger species such as poultry, pigs and cattle do not have. The objective of this research was to evaluate the effect of CLA in the diet of Nueva Zelanda rabbits on meat quality.

 MATERIAL AND METHODS Experimental conditions

Nueva Zelanda rabbits (n=15) were acquired from the UNAM rabbit farm, Mexico, and transported by land to the zootechnical post of the University of Papaloapan, campus Loma Bonita, Oaxaca. The study was divided into two stages: the probiotic stage and the CLA stage. Newly weaned females (30 d) presented similar birth date and weight (762 ±50.9 g). The population was divided into two experimental groups: control (T) and probiotic treatment (P), housed in double cages of galvanized mesh with dimensions of 90 x 60 x 40 cm. The two groups: T and P were fed ad libitum with commercial base feed (Conejina TurboMR, Purina, Mexico) but the P group was administered probiotic BioPlus 2B® (Chr. Hansen BioSystems A/S, Denmark), the probiotic stage lasted six weeks. Then, in the CLA stage (seventh week), the population was divided into three groups: control (T), treatment 1 (T1) and treatment 2 (T2), with five rabbits each. The females were distributed to control experimental noise and to allow the coincidence of characteristics such as age, live weight, genotype, origin (same farm) and management.

 Experimental diets

The three groups were fed a diet based on cereals, minerals and essential oils (Table 1), but with different CLA content (Corino et al., 2003).Diets were prepared by hand, without pelleting or extrusion.

Ingredients used in diets for rabbits
Ingredient (g) T T1 T2
Alfalfa hay 52 52 52
Ground corn 18 18 18
Soybean meal 12 12 12
Oats 9 9 9
Wheat bran 5 5 5
Salts and minerals 1.5 1.5 1.5
Canola oil 1.5 1.1 0.7
Synthetic methionine 0.5 0.5 0.5
CLA 0 0.4 0.8

T= without CLA; T1= 0.4 g CLA kg-1; T2 = 0.8 g CLA kg-1. Protein: 20.5±0.9 %, EE: 2.8±0.1%, Ash: 6±0.1% and Crude fiber: 19±0.8%.

CLA was purchased from the supplier GNC® presentation in a bottle of 90 capsules of 1.6 g, each containing CLA 55 mg. Each ration contained CLA administered in aqueous dilution with 20 mL of distilled water. The application was after preparing the complete ration and by manual atomization. The second stage lasted six weeks and the total time was 12 weeks.

 Microbiological quality

Soft feces (cecotrophs) were analyzed as part of normal feeding behavior in T and P. The microbiological study included the counting of three microbial groups: lactic acid bacteria (LAB), enterobacteria and clostridium. The procedure for sample collection, handling, transport, preparation and dilution was carried out according to Linaje et al., (2004). The identification of LAB was performed on MRS Agar, enterobacteria on MacConkey Agar and clostridium on Reinforced Clostridial Agar. The culture media were prepared according to specifications of the supplier Fluka Analytical©, Switzerland. During the collection of the cecotrophs, sterile forceps, gloves and test tubes were used, transferred to the chemical analysis laboratory and stored frozen at -18 °C.

The 1g sample treatment of cecotrophs was transferred to sterile Stomacher bags, sterile 0.1% pepton water (1g peptone, 8.5 g NaCl in 1000 mL water) was added to a 1:10 dilution, the mixture was homogenized for 1-2 min. Appropriate aliquots of dilutions were taken from test tubes with 0.1% sterile pepton water. The analysis was performed in triplicate and colonies were counted after the incubation time. The criterion used in the selection of the boxes was 30 and 300 colonies. Counts obtained were expressed as Log10 CFU g-1.

 Zootechnical parameters

Live weight (LW) of rabbits was recorded weekly in the mornings, during the duration of the experiment and before feeding the experimental diet. Feed efficiency (FE) was determined with expression 1. In practice, the inverse of this ratio is known as feed conversion (FC) calculated with expression 2 and is used in animal husbandry to refer to the conversion of feed to weight gain. In all cases the weight was obtained with a Torrey©, Mexico, model LPCR multifunctional scale.

EA = (average daily weight gain/average daily feedings) (1)

FC = (1/FE) (2)

These expressions are indicators of nutrition, the former measures biological efficiency, while the latter is an economic measure of feeding. Animals with a low FC value tend to be more efficient, (Gaillard et al., 2020), however, they are different depending on the species, genetics, health status, feeding practices and environmental conditions. On the other hand, the rabbits were desensitized and slaughtered according to NOM-033-SSA1, inside the chemical-biological laboratory of the university. Rabbit carcasses were frozen after slaughter at 5 °C until further analysis. Live weight (LW) was recorded before slaughter; cold carcass weight (CC) and offal (O) corresponding to viscera, feet, head and tail were obtained after slaughter. Weight gain was obtained by difference, while perirenal fat (PRF) and interscapular fat (IF) were obtained from the kidney area and external vertebral section, respectively. For all the determinations, an Ohaus© model CS-5000 granatary balance was used.

 Physicochemical quality

Physicochemical quality was analyzed after slaughter and at 24 h postmortem on carcasses from two different muscles; Longissimus dorsis (LD) and Biceps femoris (BF). Proximal analysis of dry matter (DM), moisture (M), ash (As), ethereal extract (EE) and crude protein (CP) (AOAC, 1990) was carried out in triplicate. Hydrogen potential (pH) was analyzed with an Orion Star A211 pH meter, Thermo Scientific, according to NOM- 317-S-1978. Color saturation (*a, *b and *L), was analyzed using an UltraScan® Vis colorimeter (HunterLab, H unter Associates Laboratory Inc., Hills Road, Reston, Virginia USA). The color reading was determined in both muscles, in the visible zone from (400 to 700 nm).

Water retention capacity (WRC), was analyzed using 0.6 M NaCl as an added solution, the sample was allowed to stand for 30 min and centrifuged at 3000 rpm for 15 min. The supernatant was quantified as percentage of water retained in the sample. The FA profile, was quantified with a solid-liquid extraction and a 2:1 v/v chloroform-methanol mixture, (Figueiredo et al., 2016). The solution was analyzed by gas chromatography (GC) with an HP chromatograph equipped with flame ionization detector and a SupelcoWax-10 capillary column of 100 m x 0.25 mm diameter and a film thickness of 0.2µm. The results obtained were expressed as % FA.

 Statistical analysis

The data obtained were normalized and analyzed by analysis of variance and Tukey's mean comparison with a significance level p≤0.05.

 Microbiological quality

The average BAL count during the duration of the experiment was 8.27 + 0.72 CFU g-1 and 8.37 + 0.62 CFU g-1 for T and P, respectively. Figure 1 shows the behavior of BAL and indicates that there is a difference between the two groups.

Quantification of BAL in rabbit caecotrophs for 6 weeks

The average of enterobacteria in T was 6.64 ± 1.85 Log10 CFU g-1 and for P there was no growth of this bacterial group, even from the first sampling. Finally, the Clostridium spp. counts were 8.31±0.87 CFU g-1 and 8.39±0.60 CFU g-1 for T and P, respectively.

 Zootechnical parameters

The LW of rabbits is higher in T compared to T1 and T2 even though WG is the same for all groups (Table 2). CC weight is obtained after slaughter and it was observed that T1>T>T>T2 and is consistent with D where it is shown that T1 and T2 represent a higher amount of offal (skin, feet and tail), which can also be utilized as by-products (local handicrafts). Viscera, blood and organs can be transformed into meal, an ingredient for animal feed. The FE ratio is the same at T1 and T2 and FC has a value of 2.2 and 2.1, respectively.

Zootechnical parameters of rabbits supplemented with CLA
Variable T T1 T2 ±
LW (kg) 2.1 2.4 2.3 1.4
WG, (kg) 1.1 1.1 1.1 0.01
CC (kg) 1.2 1.3 1.0 0.05
O (kg) 0.9 1.1 1.3 0.05
FE 0.3 0.2 0.2 0.01
FC 2.0 2.2 2.1 0.03
PRF (g) 4.8 8.8 9.5 2.5
IF (g) 1.0 2.8 2.2 0.9

T=without CLA, T1=0.4 g CLA kg-1, T2=0.8 g CLA kg-1. LW=live weight, CC=cold carcass, O=offal, FC=feed conversion, FE=feeding efficiency, WG=weight gain, PRF=perirenal fat, IF=interscapular fat, SD=standard deviation.

Finally, PRF values are different in both treatments and T and this behavior is present in IF values.

 Physicochemical quality

The proximal chemical composition is shown in Table 3, the H content is 74-73%, similar to that reported by FAO, which reports 74.9% in rabbit meat. DM, therefore, presented the highest content in proximal analysis (25-26%). The C content represents the minerals, that is, the essential ions for humans; it was different only when compared by treatment (Table 3).

Proximal composition in rabbit meat supplemented with CLA.
% T T1 T2 SEM Prob LD BF SEM Prob
DM 25.66 26.33 25.84 0.410 NS 25.94 25.95 0.335 NS
P 22.44 23.07 23.06 0.396 NS 22.51 22.52 0.373 NS
C 1.37ab 1.29a 1.47b 0.038 0.005 1.38 1.39 0.031 NS
EE 1.27 1.30 1.17 0.208 NS 1.23 1.24 0.170 NS

Control =no CLA, T1=0.4 gCLA Kg-1, T2=0.8 gCLA Kg-1. LD= Longissimus dorsis, BF= Biceps femoris. Values present mean ±SEM. abcd, different letters in each column indicate significant difference (p≤0.05). SEM=standard error of the mean, NS=not significant.

The technological quality parameters of the meat are shown in Table 4. WRC changes during the posmorten period and decreases as the meat matures. It was observed that there is a statistical difference between treatments (T1 and T2) and muscles (LD and BF) after 1 and 24 h after slaughter. WRC is a parameter that depends on pH, which causes loss of moisture, change in texture, increase in tenderness and difference in color. The change in pH towards acid values is associated with the irreversible process of muscle contraction at the level of the actin-myosin chains and the production of lactic acid, which lowers the pH to 5.4. The pH value in this study shows significant changes only between treatments (T1 and T2) after 1 and 24 h of sacrifice. Factors associated with WRC changes and pH are the production of lactic acid and therefore the decrease in pH, the consumption of glycogen in the muscle, the decrease in energy compounds (ADP and ATP) that initiate cadaveric stiffness and, therefore, protein denaturation.

Technological quality parameters of meat from rabbits supplemented with CLA
% T T1 T2 SEM Prob LD BF SEM Prob
WRC1h 18.65ab 19.08b 17.53a 0.501 0.04 17.79 19.04 0.409 0.05
WRC 24h 9.36b 8.88a 8.86a 0.150 0.04 8.43 9.64 0.123 0.01
pH1h 6.42 6.42 6.52 0.050 NS 6.84 6.07 0.041 0.01
pH24h 5.94 5.98 5.96 0.065 NS 6.29 5.66 0.053 0.01
Color24h
L* 62.44 60.36 62.19 0.976 NS 60.96 62.36 0.797 NS
b* 12.30 12.37 11.86 0.664 NS 10.31 14.04 0.542 0.01
a* -0.05a -0.28ab -0.57b 0.176 0.05 -2.82 2.22 0.144 0.01

Control =no CLA, T1=0.4 gCLA Kg-1, T2=0.8 gCLA Kg-1. LD= Longissimus dorsis, BF= Biceps femoris. WRC =water retention capacity, L*=luminosity, a*=red, b*=yellow. Values present mean ±SEM. abcd, different letters in each column indicate significant difference (p≤0.05). NS= not significant.

Color is associated with physical (b*), chemical (a*) and hemoglobin content (L*). In all cases the parameter L>b>a (Table 4). The parameter L* associated with hemoglobin content was the only parameter that did not show a significant difference when the results were analyzed by treatments (T1 and T2) and by muscle type (LD and BF). This is important because color is not affected by the diets tested and also when this analysis is performed on two different commercial muscles. The parameter b* was statistically different when compared by treatments (T1 and T2) while a* was not different when the results were evaluated in both conditions.

 Fatty acid profile

On the other hand, the FA profile is shown in Table 5, it is observed that the composition in rabbit meat from LD muscle was 18:1>C14:0>C16:0>FAPI, presenting a significant difference only in the FA C18:1 among the treatments tested. While the BF muscle composition was C18:2>C18:1>C16:0>C18:2, c9t11>C18:2, c12t10>C14:0.

FA profile in meat from rabbits supplemented with CLA
Longissimus dorsis Biceps femoris
T T1 T2 T T1 T2 SEM
C14:0 21.4b 23.91c 23.50c sd sd sd 0.55
C16:0 8.49a 9.12a 8.73a 11.38b 21.79d 20.10c 0.41
C18:1 27.16de 24.40bc 28.13e 13.92a 25.78cd 24.08b 0.52
C18:2 nd nd nd 16.51b 25.84c 26.94c 0.62
C18:2, c9t11 nd nd nd nd 0.487b 0.710c 0.03
C18:2, c12t10 nd nd nd 5.3b nd nd 0.06

Control=no CLA, T1=0.4 gCLA kg-1, T2=0.8 gCLA kg-1. Values present mean ±SEM, abcd, different letters in each column indicate significant difference (p ≤ 0.05), nd=not detected.

 DISCUSSION

Latorre et al., (2014) evaluated the persistence of Bacillus subtilis spores, a type of LAB, through the gastrointestinal tract (GIT), the results showed that approximately 90% of the spores germinate in the GIT. Changes related to different physiological, nutritional and microbiological conditions can be compared with LAB, which have the ability to germinate at the GIT level and survive in the tested environment, as shown in Figure 1. The increase of LAB in this study during weeks 4 and 6 allows inferring a possible increase in the production of antimicrobial substances that help the health of the rabbit's GIT. The administration of probiotic has the function of preventing or delaying the onset of gastrointestinal diseases and rabbits that consumed probiotic in the diet showed adequate health condition (Gaggia et al., 2010). E. coli bacteria belong to the enterobacteria family and their presence is associated with diarrhea in newly weaned animals and the substitution of antibiotics in the diet. Zootechnical characteristics can be significantly improved due to the development and maintenance of the cecal microbiota that promotes the health status of the animals. The probiotics Saccharomyces cerevisiae and Enterococcus faecilum were administered orally for two weeks in healthy rabbits; the treatment did not affect fecal levels of bacteroides species, fibrobacter succinogenes or clostridium spiroforme, (Summa & Brandao, 2017).

Meat technological quality parameters, pH, WRC and color showed expected changes while zootechnical parameters were low to those reported by Palma & Hurtado (2009), they fed male young rabbits for 60 d with a combined diet of commercial feed (CFE) and fresh Creole mango (CM), the CA was from 2.41 to 2.13 in diets with 60 and 40 g of CFE and 60 and 80 g of CM. In another study, (Corino et al., 2003) found that animals supplemented with CLA did not obtain significant differences in productive parameters. Pérez-Martínez et. al., (2018) evaluated productive parameters in rabbits fed with different parts of the Tithonia tubaeformis plant, they found no significant difference in the measured variables, however, the CFE was from 3.18 to 3.41 such results are similar to what was reported by Meineri et al., (2010) y Dalle Zotte & Szendro (2011).

Malavé (2013), reported that dietary supplementation of different animals did not significantly affect proximal chemical composition, results consistent with this study where difference was observed only in T content (1.47-1.29%).

These results indicate the presence of CLA, cis-9, trans-11, in meat from BF muscle in both treatments and it is higher in T2, that is, when rabbits are fed 0.8 gCLA Kg-1. Corino et al., (2003) determined the FA profile in Longissimus lumborum in rabbits supplemented with 0.5% CLA and obtained 20% of C18:1, 29% of C18:2n6 and 25% of C16:0. In another study, the relative proportion of different types of FA in LD was reported, reaching 38% saturated FA, 28% monounsaturated FA and 32% polyunsaturated FA. These proportions of FA allow comparing rabbit meat with other species such as pork, chicken, veal and beef (Dalle Zotte & Szendrő, 2011). However, rabbit meat has functional characteristics such as low cholesterol content, high content of protein and essential amino acids; especially in LD, high digestibility and high levels of polyunsaturated FA that allow it to be considered as a functional food with nutritional and dietary properties (Dalle & Szendrő, 2011).

 CONCLUSIONS

Meat quality depends on several parameters, in this study the CLA-enriched diet was analyzed on microbiological, productive and physicochemical quality. The microbiological quality indicated that LAB are present during the time of the study (six weeks) and it is sufficient to inhibit enterobacteria. This behavior is important considering that in the first weeks of life immunity is acquired in the presence of various pathogens that damage the animal's health. The commercial weight was reached in 80 d of feeding with a low FC and a carcass yield according to expectations. The productive quality is not affected when two different diets are fed, however, the evaluation of the physicochemical quality of the meat indicated that the WRC is the parameter affected in the evaluation and is reflected in the physicochemical state of hemoglobin. The FA profile showed that SFAs do not change by muscle type and the presence of CLA was demonstrated at least in BF muscle. This can be used to consider BF or thigh meat as an alternative source of CLA.