aa Abanico agroforestal Abanico agro 2594-1992 Sergio Martínez González 10.37114/abaagrof/2020.7 Artículo Original Extractos vegetales para el control de Fusarium oxysporum, Fusarium solani y Rhizoctonia solani, una alternativa sostenible para la agricultura 0000-0003-4388-0901 Rodríguez-Castro Alfredo 1 0000-0002-2936-4567 Torres-Herrera Sandra 2 0000-0001-9520-2817 Domínguez-Calleros Antonio 2 0000-0001-7326-6051 Romero-García Ana 3 0000-0002-3899-2151 Silva-Flores Miguel * 1 Tecnológico Nacional de México/Instituto Tecnológico Superior de Rioverde. Carretera Rioverde-San Ciro Km 4.5 Col. María del Rosario. CP. 79610. San Luis Potosí, México. Instituto Tecnológico Superior de Rioverde Instituto Tecnológico Superior de Rioverde San Luis Potosí Mexico Facultad de Ciencias Forestales, Universidad Juárez Estado de Durango. México. Facultad de Ciencias Forestales Universidad Juárez Estado de Durango México Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica A.C., Camino a La Presa de San José 2055, Lomas 4 sección. CP. 78216. San Luis Potosí, México. Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica A.C. San Luis Potosí México *Autor para correspondencia: Miguel Silva-Flores. ing.josealfredorodriguez@gmail.com, sith.chany@gmail.com, pdomingc@hotmail.com, alrg_6@hotmail.com, miguelangelsilvaflores@gmail.com. 30 07 2021 01 2020 2 208 17 02 2020 10 07 2020 Este es un artículo publicado en acceso abierto bajo una licencia Creative Commons RESUMEN

Actualmente la agricultura requiere alternativas al uso de agrotóxicos para controlar fitopatógenos, los extractos vegetales pueden contribuir a minimizar pérdidas por fitopatógenos sin causar daños a la salud humana. El objetivo de este trabajo fue evaluar in vitro, el efecto de extractos de plantas sobre Fusarium oxysporum, Fusarium solani y Rhizoctonia solani. Se evaluaron los extractos metanólicos (EM) de: Moringa oleifera (Moringa), Persea americana (Aguacate), Equisetum hymale (Cola de caballo), Larrea tridentata (Gobernadora), Gnaphalium semiamplexicaule (Gordolobo), Peumus boldus (Boldo), Brickellia squarrosa (Prodigiosa), Rosmarinus officinalis (Romero) y Physalis coztomatl (Costomate), que se obtuvieron utilizando un equipo Soxhlet a una concentración del 10% (p/V). Mediante el software estadístico MInitab 16® México, se hizo un análisis de varianza (ANDEVA) y comparación de medias de Tukey (p ≤ 0.05). Por separado se determinó el porcentaje de inhibición del crecimiento micelial. El EM de Larrea tridentata (Gobernadora) inhibió al 100% el crecimiento de Fusarium solani y de Rhizoctonia solani hasta por 144 h, y de F. oxysporum hasta por 240 h. Los EM de Brickellia squarrosa (Prodigiosa) y Rosmarinus officinalis (Romero) también inhibieron el crecimiento micelial. Estos extractos representan una excelente alternativa al control y manejo convencional de fitopatógenos.

Palabras clave: fitopatógenos Fusarium oxysporum F. solani Rhizoctonia solani extractos vegetales y biocontrol Fondos Mixtos FOMIX-SLP FMSLP-2013-C01-209337 INTRODUCCIÓN

Los avances científicos y tecnológicos consiguen aumentar la productividad de la agricultura. En general, el aumento se debe a la incorporación de productos sintéticos como fertilizantes y plaguicidas que generan problemas ambientales (Samsidar et al., 2018). Actualmente la agricultura requiere alternativas ecológicas, económicas y amigables con el ambiente para manejar enfermedades y minimizar el uso de agroquímicos sintéticos (Tamilselvi y Arumugam, 2017), que no perjudiquen la salud de los jornaleros agrícolas y consumidores (Samsidar et al., 2018).

Las enfermedades en la raíz en los cultivos son de los problemas más difíciles de controlar, porque en el suelo existen condiciones muy particulares que le brindan a los fitopatógenos de raíz (FR), elementos y condiciones óptimas para su establecimiento y desarrollo (García, 2010). Ante la necesidad de contar con soluciones ecológicas y de reducir el impacto negativo de los agrotóxicos en los ecosistemas, se ha encontrado en los extractos de plantas una opción sustentable para mitigar los problemas fitosanitarios y disminuir las pérdidas económicas que estos originan (Cerqueira et al., 2016).

Tradicionalmente el control y manejo de los problemas fitosanitarios se hace con agrotóxicos, este manejo acarrea consecuencias adversas en la salud y en el ecosistema; además de generar resistencia en los fitopatógenos a algunos compuestos de síntesis química empleados en la agricultura (Del Puerto et al., 2014). Sin embargo, se debe explorar la factibilidad del control de fitopatógenos con otras opciones como los extractos vegetales, los cuales pueden ser igual de efectivos para el control de y manejo de agentes fitopatógenos. Los extractos se pueden obtener a través de diferentes métodos: destilación con vapor-extracción con solvente, extracción con fluido supercrítico (Stashenko et al., 2003); soxhlet y lixiviación o percolación en frío (Henao et al., 2009). Existen trabajos de investigación donde se emplean extractos de plantas para el manejo de agentes fitopatógenos, en ese sentido están los que se han hecho para; inhibición de Phytophthora infestans (Gamboa-Alvarado et al., 2003), control de Pythium (Lira-Saldívar et al., 2003; Osorio et al., 2010), control de Verticillium dahliae (López-Benítez et al., 2005), Sclerotinia sclerotiorum (Al-Reza et al., 2010), Fusarium oxysporum (Rodríguez et al., 2012; Cáceres Rueda de León et al., 2013; Vásquez et al., 2014; Dania et al., 2014; Ferdes et al., 2017), control de Fusarium solani (Zaker, 2014; Vásquez et al., 2014) y Rhizoctonia solani (López-Benítez et al., 2005; Jasso de Rodríguez et al., 2007; Zamora-Natera et al., 2008; Dania et al., 2014).

El efecto de los extractos de las plantas sobre algunos patógenos, ya sean de interés médico o agrícola, se debe a que contienen metabolitos secundarios con efecto fungicida y/o bactericida, destacan los compuestos fenólicos, cumarinas, flavonoides, taninos, quinonas, entre otros. Existen trabajos donde se evalúa el efecto de plantas sobre diversos patógenos; por ejemplo, el efecto de los extractos de: Moringa oleífera (Canett-Romero et al., 2014), Equisetum hymale (De Queiroz et al., 2015), Larrea tridentata (Bañuelos-Valenzuela et al., 2018), Peumus boldus (Mazutti et al., 2008) y Rosmarinus officinalis (Rozman y Jersek, 2009).

Por lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue evaluar in vitro, el efecto de nueve extractos metanólicos, sobre los agentes fitopatógenos, Fusarium oxysporum, F. solani y Rhizoctonia solani. Con la hipótesis que los extractos vegetales son capaces de controlar e inhibir el crecimiento de algunos microorganismos fitopatógenos.

MATERIAL Y MÉTODOS

El estudio se realizó en las instalaciones del Instituto Tecnológico Superior de Rioverde (ITSR), ubicado en la Carretera Rioverde-San Ciro de Acosta, Km. 4.5, Col. María del Rosario, Rioverde, San Luis Potosí, México. Para el presente estudio se utilizaron extractos de nueve plantas reconocidas; las cuales fueron: Moringa oleifera (Moringa, hojas), Persea americana (Aguacate, hojas), Equisetum hymale (Cola de caballo, vástagos), Larrea tridentata (Gobernadora, hojas), Gnaphalium semiamplexicaule (Gordolobo, vástagos), Peumus boldus (Boldo, vástagos), Brickellia squarrosa (Prodigiosa, vástagos), Rosmarinus officinalis (Romero, vástagos) y Physalis coztomatl (Costomate, raíces). Los extractos al 10% p/V (peso/Volumen), se obtuvieron con el equipo Soxhlet (Cornig-Pyrex Modelo 3840-XL®), durante cinco ciclos utilizando metanol (Merck®) como solvente de arrastre.

Los extractos se envasaron en frascos de vidrio ámbar y se almacenaron a 4°C; la extracción con Soxhlet se hizo ocho días antes de la preparación de las cajas (Gamboa-Alvarado et al., 2003)

Los hongos fitopatógenos utilizados en este trabajo fueron Fusarium oxysporum, F. solani y Rhizoctonia solani. Estos microorganismos fueron aislados de cultivos locales de Jitomate (Solanum lycopersicum), e identificados mediante técnicas moleculares. La extracción del DNA se hizo siguiendo el protocolo descrito por Reader y Broda (1989). Se amplificó la secuencia de la región interna del transcrito del 18S Rdna, usando los oligos universales ITS1 (5´TCC GTA GGT GAA CCT GCG G 3´) y el ITS4 (5´TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 3´), diseñados por White et al., (1990). Los productos del PCR fueron clonados en el vector pGEM-Teasy, siguiendo las instrucciones del fabricante (Promega 2015); se secuenciaron por el método de Sanger en el Laboratorio Nacional de Biotecnología Agrícola, Médica y Ambiental del Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica A.C. Una vez secuenciados los ITS se analizaron con BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) (Morgulis et al., 2008) en el NCBI (National Center for Biotechnology Information) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/.

<bold>Evaluación <italic>in vitro</italic> de los extractos vegetales contra fitopatógenos</bold>

La evaluación del efecto de los extractos (25 ppm) se hizo mediante el método de cultivo envenenado (Grover,1962; Gamboa-Alvarado et al., 2003). Esta técnica consiste en incorporar el extracto vegetal en medio de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA BD Bioxon® México) y medir el crecimiento micelial de los fitopatógenos F. solani, F. oxysporum y R. solani. Los tratamientos de los extractos de moringa, gobernadora, aguacate, cola caballo, boldo, gordolobo, prodigiosa, romero y costomate, se evaluaron colocando 500 µL (25ppm) de los extractos por caja Petri (20 mL); se incluyó como control agar sin extracto alguno (solo PDA). Se evaluó por triplicado cada uno de los extractos contra cada uno de los fitopatógenos (R. solani, F. solani y F. oxysporum), midiendo cada 24 h el crecimiento micelial con un vernier digital de precisión +/-.001", +/-.02 mm (Mitutoyo; 500-196-30C®).

Para cultivar los microorganismos se utilizó medio PDA, 39 g por litro de agua destilada estéril. En cajas Petri de 90 mm de diámetro se vertieron 20 mL de una mezcla PDA:EM (Papa Dextrosa Agar: Extracto Metanólico), en una proporción de 1:0.05; es decir, 500 µL de extracto por caja. Todo lo anterior en campana de flujo laminar (Marca LABCONCO® LABCO07283).

Después de este tiempo las cajas se inocularon con un explante de 5 mm de diámetro de PDA, con crecimiento del fitopatógeno y se incubaron en una cámara bioclimática a 25 °C (Marca Thermo Scientific® Mod 3949). Todas las pruebas se hicieron por triplicado en un diseño experimental completamente al azar.

Análisis de los datos

Con los datos obtenidos en la fase experimental se calculó el porcentaje de inhibición del crecimiento micelial con la fórmula:

I.C.M.=[(Dc−Dt)/Dc]𝑥100

dónde: I.C.M. es el porcentaje de inhibición del crecimiento del micelio, Dc es el diámetro del micelio en el control y Dt = diámetro del micelio en el tratamiento.

Asimismo, se hizo el análisis de varianza (ANDEVA) y la comparación de medias múltiple de Tukey (p ≤ 0.05). El análisis se hizo con el software estadístico Minitab 16® México.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Al evaluar el efecto de los Extractos Metanólicos (EM) sobre Fusarium oxysporum, se observó diferencia estadística entre los tratamientos (p ≤ 0.05). El EM de L. tridentata inhibió al 100 % el crecimiento del patógeno hasta por 144 h, y 90% hasta por 240 h; mientras que el de R. officinalis inhibió el 50.7% hasta 72 h, y 42.2 % por 144 h (cuadro 1). López-Benítez et al., en el 2005, presentaron resultados similares, en los que indican que los extractos de Syzygium aromaticum y L. tridentata al 10% inhiben el crecimiento de F. oxysporum f. sp. Lycopersici, hasta por 144 h. Dania et al., en el 2014, documentaron que los extractos acuosos (EA) de Oryza sativa y Quercus phillyraeoides al 1.5 y 2.5 % pueden inhibir in vitro totalmente el crecimiento de seis fitopatógenos, entre ellos F. oxysporum.

Inhibición del crecimiento micelial (ICM, %) de <italic>Fusarium oxysporum</italic> con diferentes extractos metanólicos a 72, 144 y 240 h, después del inicio del experimento
Extracto vegetal 72h 144 h 240 h
L. tridentata 100.0 ± 0.0 a 100.0 ± 0.0 a 89.4 ± 0.3 a
B. squarrosa 39.8 ± 4.4bc 38.6 ± 2.3 bc 31.7 ± 2.7 b
G. semiamplexicaule 24.6 ± 2.3 cd 28.3 ± 1.2 cd 24.2 ± 2.4 bc
P. americana 25.1 ± 5.4 cd 26.3 ± 2.2 d 12.9 ± 4.9 cd
P. boldus 26.0 ± 3.9 cd 24.5 ± 4.1 d 11.7 ± 2.7 cd
P. coztomatl 24.8 ± 4.2cd 27.4 ± 1.5c 9.2 ± 4.0 bc
M. oleifera 19.7 ± 3.4 d 17.1 ± 2.9 d 4.0 ± 1.4 d
R. officinalis 50.7 ± 2.9 b 42.2 ± 1.5 b 29.6 ± 2.2 b

Medias con letra diferente indican diferencia estadística (Tukey, p ≤ 0.05).

Por otra parte los extractos etanólicos (EE) de Fluorensia cernua (Hojasén), F. microphylla y F. retinophylla mostraron ser una alternativa efectiva para el control de Fusarium oxysporum, inhibiendo el 100 % su crecimiento, con una concentración de 1500 µL L-1 (Jasso de Rodríguez et al., 2007).

Existen trabajos donde también se han evaluado Aceites Esenciales (AE) para el manejo de F. oxysporum; en ese sentido está el trabajo de Ferdes et al., en el 2017, con AE de R. officinalis, en una concentración de 20 µg mL-1 se inhibe el 93 % del crecimiento de F. oxysporum; mientras que con 10 µg mL-1 de los AE de P. anisum y S. hortensis se inhibe totalmente el crecimiento de F. oxysporum. Asimismo Vásquez et al., en el 2014, concluyeron que los AE de Chenopodium ambrosioides al 2% y Chenopodium album al 0.03 %, inhiben por completo el crecimiento de F. oxysporum f. sp. Lycopersici, hasta por 11 días.

En este estudio, el EM de L. tridentata inhibió el crecimiento de F. oxysporum, hasta por 144 h, seguido en efectividad por el de R. officinalis y B. squarrosa. Con estos tratamientos se inhibe el crecimiento micelial hasta 80 %, comparado con el control negativo (cuadro 2). Estos resultados coinciden con los reportados por Osorio et al., en el 2010, ellos concluyen que con una concentración de 0.7 mg kg-1 L. tridentata inhibe el 100% el crecimiento de F. oxisporum in vitro.

Crecimiento micelial promedio (mm) de <italic>Fusarium oxysporum</italic> con diferentes extractos metanólicos a 72, 144 y 240 h, después del inicio del experimento Medias con letra diferente indican diferencia estadística (Tukey, p ≤ 0.05)
Extracto vegetal 72 h 144 h 240 h
Agar 22.3 ± 0.4 a 44.4 ± 0.7 a 65.9 ± 0.7 a
L. tridentata 0.0 ± 0.0 e 0.0 ± 0.0 e 7.0 ± 0.2 e
B. squarrosa 13.4 ± 1.0 cd 27.3 ± 1.0 cd 45.0 ± 1.7 d
R. officinalis 11.0 ± 0.6 d 25.7 ± 0.6 d 46.4 ± 1.4 d
G. semiamplexicaule 16.8 ± 0.5 bc 31.8 ± 0.5 bc 50.0 ± 1.6 cd
P. coztomatl 16.8 ± 0.9 bc 32.3 ± 0.7 bc 53.3 ± 2.6 cd
E. hymale 18.2 ± 0.1 b 35.4 ± 1.5 b 56.7 ± 1.7 bc
P. americana 16.7 ± 1.2 bc 32.7 ± 1.0 b 57.5 ± 3.2 abc
P. boldus 16.5 ± 0.9 bc 33.5 ± 1.8 b 58.3 ± 1.8 abc
M. oleifera 17.9 ± 0.8 b 36.8 ± 1.3 b 63.3 ± 0.9 ab

Medias con letra diferente indican diferencia estadística (Tukey, p ≤ 0.05)

En los resultados de los extractos sobre Fusarium solani, mediante el ANDEVA y la comparación de medias Tukey (p≤0.05), se observó diferencia estadística significativa entre los tratamientos. El EM de L. tridentata inhibió el 100% del crecimiento de F. solani, hasta por diez días; mostrando un efecto de inhibición importante sobre este fitopatógeno.

Lo anterior es relevante si se considera que hay productos químicos que se aplican una o más veces por semana y no logran estos resultados, incluso en condiciones de laboratorio no logran inhibir al 100% el crecimiento del micelio, tal como lo reportan Yossen y Conles en el 2016, que en su trabajo con moléculas comerciales, alcanzan una inhibición de entre el 60 y el 97%. El EM de R. officinalis evaluado en este trabajo inhibió en un 70 % el crecimiento del micelio, respecto al control hasta por 144 h. Este dato es similar al obtenido con extractos acuosos de Prosopis juliflora y Lantana camara, que consiguen un 80 y 69% de inhibición micelial, respectivamente (Seetha et al., 2010). Asimismo, los estudios de David et al., en el 2013, reportan que el EM de botones florales de Calotropis gigantea al 25%, reduce 68% el crecimiento de F. solani.

Inhibición del crecimiento micelial (ICM, %) de <italic>Fusarium solani</italic> con diferentes extractos metanólicos a 72, 144 y 240 h, después del inicio del experimento
Extracto vegetal 72 h 44 h 240 h
L. tridentata 100.0 ± 0.0a 100.0 ± 0.0 a 100.0 ± 0.0 a
R. officinalis 64.7 ± 0.9 b 70.2 ± 0.3 b 58.5 ± 1.7 b
B. squarrosa 37.9 ± 0.4 c 37.2 ± 1.3 c 11.8 ± 0.9 c
P. coztomatl 26.5 ± 1.2 de 28.5 ± 1.8 d 5.7 ± 0.4 d
P. americana 26.9 ± 2.5 de 28.4 ± 1.2 d 0.5 ± 0.5 e
P. boldus 31.2 ± 1.2 cd 30.8 ± 0.3 d 0.0 ± 0.0 e
G. semiamplexicaule 26.3 ± 2.0 de 28.1 ± 0.3 d 0.0 ± 0.0 e
M. oleifera 22.6 ± 3.4 de 15.5 ± 0.9 f 0.0 ± 0.0 e
E. hymale 21.5 ± 2.4 e 22.2 ± 0.6 e 0.0 ± 0.0 e

Medias con letra diferente indican diferencia estadística (Tukey, p ≤ 0.05)

Es importante contar con opciones ecológicas para el control de hongos fitopatógenos, como las exploradas en este trabajo. En esta investigación, los resultados con el EM de L. tridentata coincidieron con los de Osorio et al., en el 2010, quienes utilizaron extractos polifenólicos de L. tridentata, y consiguen inhibir el 100 % del crecimiento de F. solani, con una concentración de 0.70 mg L-1.

En un estudio conducido por Vásquez et al., (2014), se evaluó el efecto fungistático de extractos acuosos (EA) y aceites esenciales (AE) de especies del género Chenopodium sobre F. solani; los autores concluyeron que el AE de Chenopodium ambrosioides al 2% y Chenopodium album al 0.03% inhiben por completo el crecimiento de F. solani, hasta por 11 días; mientras que en este trabajo L. tridentata lo inhibió al 100% hasta por 10 días. Otro caso con resultados similares sobre Fusarium spp. fue el trabajo de Duarte et al., en el 2013, quienes con aceites esenciales de Piper aduncum subsp. ossanum y Piper aurintum inhiben totalmente el crecimiento de este hongo.

Por otra parte, Zaker (2014) concluyó que el EM de hojas de Artemisia annua al 15%, es capaz de inhibir el crecimiento de F. solani; mientras que en el presente trabajo en EM de L. tridentata inhibió al 100% el crecimiento de F. solani, seguido de los extractos de R. officinalis y B. squarrosa; los cuales, aunque en menor proporción también lo inhiben (cuadro 4).

Crecimiento micelial promedio (mm) de <italic>Fusarium solani</italic>, con diferentes extractos metanólicos a 72, 144 y 240 h, después del inicio del experimento
Extracto vegetal 72 h 144 h 240 h
Agar 30.1 ± 0.4 a 66.6 ± 0.7 a 80.0 ± 0.0 a
L. tridentata 0.0 ± 0.0 f 0.0 ± 0.0 g 0.0 ± 0.0 e
R. officinalis 10.6 ± 0.3 e 19.8 ± 0.2 f 33.2 ± 1.3 d
B. squarrosa 18.7 ± 0.1 d 41.9 ± 0.9 e 70.5 ± 0.8 c
P. coztomatl 22.1 ± 0.3 bc 47.6 ± 1.2 d 75.5 ± 0.3 b
P. americana 22.0 ± 0.8 bc 47.7 ± 0.8 d 79.6 ± 0.4 a
P. boldus 20.7 ± 0.4 cd 46.1 ± 0.2 d 80.0 ± 0.0 a
G. semiamplexicaule 22.2 ± 0.6 bc 47.9 ± 0.2 d 80.0 ± 0.0 a
M. oleifera 23.3 ± 1.0 bc 56.3 ± 0.6 b 80.0 ± 0.0 a
E. hymale 23.7 ± 0.7 b 51.8 ± 0.4 c 80.0 ± 0.0 a

Medias con letra diferente indican diferencia estadística (Tukey, p ≤ 0.05)

El extracto metanólico (EM) de L. tridentata, inhibe hasta el 100% del crecimiento de Rhizoctonia solani, durante los primeros diez días. Lo anterior indica que este extracto es un fungistático eficaz. Con el ANDEVA y la comparación de medias de Tukey con una significancia del 95% se observó diferencia estadística significativa entre tratamientos, ya que además de L. tridentata, el EM de R. officinalis también presenta un porcentaje de inhibición destacable, causa un efecto fungistático del 56 y 48% a las 144 h y 240 h, respectivamente (cuadro 5).

Inhibición del crecimiento micelial (ICM, %) en el tiempo de <italic>Rhizoctonia solani</italic> con diferentes extractos metanólicos a 72, 144 y 240 h, después del inicio del experimento
Extracto vegetal 72 h 44 h 240 h
L. tridentata 100.0 ± 0.0a 100.0 ± 0.0 a 100.0 ± 0.0 a
R. officinalis 56.8 ± 0.9 b 56.2 ± 1.9 b 48.0 ± 3.0 b
B. squarrosa 32.7 ± 1.7 c 23.2 ± 2.2 c 17.8 ± 2.2 c
P. americana 24.5 ± 1.6 c 19.1 ± 1.2 cd 8.1 ± 1.3 d
P. coztomatl 26.9 ± 3.9 c 21.6 ± 1.4 cd 7.5 ± 1.1 d
P. boldus 28.7 ± 2.2 c 21.3 ± 1.1 cd 7.5 ± 2.3 d
E. hymale 25.9 ± 1.9 c 18.5 ± 0.2 cd 2.7 ± 0.9 d
M. oleifera 24.4 ± 3.1 c 17.0 ± 3.9 cd 1.8 ± 0.9 d
G. semiamplexicaule 23.8 ± 0.7 c 14.1 ± 1.3 d 1.1 ± 0.5 d

Medias con letra diferente indican diferencia estadística (Tukey, p ≤ 0.05)

Controlar el crecimiento de hongos fitopatógenos con extractos vegetales, representa un gran avance en materia de protección vegetal, en el caso de Rhizoctonia solani;Gamboa-Alvarado et al., en el 2003 reportaron resultados similares a los obtenidos en este trabajo de investigación; encontraron que el EM de Fluorensia cernua (Hojasén) a una concentración de 20 000 mg L-1, inhibe 85 % el crecimiento de este hongo hasta por 96 horas, respecto al control. López-Benítez et al., en el 2005, con extractos acuosos de L. tridentata y Cinnamomum zeylanicum al 10 %; de Syzygium aromaticum al 5 %, lograron inhibir in vitro el crecimiento hasta por 144 h, y con el extracto acuoso de Quercus phillyraeoides al 3.5% inhibieron en 94% el crecimiento del fitopatógeno. De igual manera el extracto alcaloideo de Lupinus mexicanus contra R. solani en una concentración de 5 mg mL-1 inhibe al 100% su crecimiento (Zamora-Natera et al., 2008). Jasso de Rodríguez et al., (2007) mencionan que los extractos etanólicos de Flourensia cernua y F. retinophylla a una concentración de 1000 µL L-1 inhiben su crecimiento; de igual manera Al-Reza et al., en el 2010, determinaron que el AE de Cestrum nocturnum tiene un alto poder fungistático capaz de inhibir hasta 80%el crecimiento de R. solani; también Touba et al., en el 2012, encontraron que el EA de Kaempferia galanga puede inhibirlo totalmente. Por otra parte, Dania et al., en el 2014, demuestran que el extracto acuoso de Oryza sativa Husk al 1%, in vitro, inhibe totalmente el crecimiento de este fitopatógeno.

Crecimiento micelial promedio (mm) de <italic>Rhizoctonia solani</italic>, con diferentes extractos metanólicos a 72, 144 y 240 h, después del inicio del experimento
Extracto vegetal 72 h 44 h 240 h
Agar 19.9 ± 0.2 a 45.8 ± 0.2 a 80.0 ± 0.0 a
L. tridentata 0.0 ± 0.0 d 0.0 ± 0.0 e 0.0 ± 0.0 e
R. officinalis 9.6 ± 0.2 c 19.5 ± 0.8 d 34.3 ± 2.0 d
B. squarrosa 15 ± 0.4 b 34.1 ± 1.0 c 54.2 ± 1.5 c
E. hymale 16.5 ± 0.4 b 36.2 ± 0.1 bc 64.2 ± 0.6 b
G. semiamplexicaule 17 ± 0.1 b 38.1 ± 0.6 b 65.2 ± 0.3 b
M. oleifera 16.9 ± 0.7 b 36.9 ± 1.7 bc 64.7 ± 0.6 b
P. americana 16.8 ± 0.3 b 35.9 ± 0.5 bc 60.6 ± 0.9 b
P. boldus 15.9 ± 0.5 b 34.9 ± 0.5 bc 61.0 ± 1.5 b
P. coztomatl 16.3 ± 0.9 b 34.8 ± 0.6 bc 61.0 ± 0.7 b

Medias con diferente letra indican diferencia estadística (Tukey, p ≤ 0.05)

 CONCLUSIÓN

El extracto metanólico de gobernadora (Larrea tridentata), es efectivo para inhibir el crecimiento de Fusarium oxysporum, Fusarium solani y Rhizoctonia solani, hasta por diez días. De igual manera se concluye que el extracto metanólico de Rosamarinus officinalis (Romero), se puede usar para el manejo de Fusarium oxysporum, Fusarium solani y Rhizoctonia solani, con menor efectividad que el de gobernadora.

Agradecimientos

Al proyecto de Fondos Mixtos FOMIX-SLP (FMSLP-2013-C01-209337) por el financiamiento de este trabajo de investigación. Al Ing. Fernando Mendoza González y a la M.C. Sonia Castillo Gutiérrez, por su colaboración en la revisión del documento de informe de resultados. Al Centro para la Integración del Desarrollo Agroecológico y Sosteniblidad "El Humedal" en Valle de Bravo, estado de México, por las facilidades brindadas.

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Agriculture currently requires alternatives to the use of pesticides to control plant pathogens, such as plant extracts that can help minimize losses from plant pathogens, without causing harm to human health. In this work, the effect of plant extracts on Fusarium oxysporum, Fusarium solani and Rhizoctonia solani was evaluated in vitro. The methanolic extracts (ME) of: Moringa oleifera (Moringa, leaves), Persea americana (Avocado), Equisetum hymale (Horsetail), Larrea tridentata (Gobernadora), Gnaphalium semiamplexicaule (Gordolobo), Peumus boldus (Boldo), Brickellia squarrosa (Prodigiosa), Rosmarinus officinalis (Rosemary) and Physalis coztomatl (Costomate), were obtained using a Soxhlet kit at a concentration of 10% (w/V). Using the statistical software MInitab 16® México, an analysis of variance (ANDEVA) and comparison of Tukey means (p ≤ 0.05) were performed. The mycelial growth inhibition percentage was determined separately. The ME of Larrea tridentata (Gobernadora) 100% inhibited the growth of Fusarium solani and Rhizoctonia solani for up to 144 h, and of F. oxysporum for up to 240 h. The ME of Brickellia squarrosa (Prodigiosa) and Rosmarinus officinalis (Rosemary) also inhibited mycelial growth. These extracts represent an excellent alternative to the conventional control and management of plant pathogens.

Keywords: phytopathogens Fusarium oxysporum F. solani Rhizoctonia solani plant extracts and biocontrol INTRODUCTION

Scientific and technological advances manage to increase the productivity of agriculture. In general, the increase is due to the incorporation of synthetic products such as fertilizers and pesticides that generate environmental problems (Samsidar et al., 2018). Currently agriculture requires ecological, economic and environmentally friendly alternatives to manage diseases and minimize the use of synthetic agrochemicals (Tamilselvi and Arumugam, 2017), which do not harm the health of agricultural laborers and consumers (Samsidar et al., 2018).

Root diseases in crops are one of the most difficult problems to control, because in the soil there are very particular conditions that provide root phytopathogens (RP) with elements and optimal conditions for their establishment and development (García, 2010). Given the need to have ecological solutions and to reduce the negative impact of pesticides on ecosystems, plant extracts have been found to be a sustainable option to mitigate phytosanitary problems and reduce the economic losses they cause (Cerqueira et al., 2016).

Traditionally the control and management of phytosanitary problems is done with pesticides, this management has adverse consequences on health and the ecosystem; in addition to generating resistance in phytopathogens to some chemical synthesis compounds used in agriculture (Del Puerto et al., 2014). However, the feasibility of controlling phytopathogens with other options such as plant extracts should be explored, which can be just as effective for the control and management of phytopathogens. The extracts can be obtained through different methods: steam distillation-solvent extraction, supercritical fluid extraction (Stashenko et al., 2003); soxhlet and cold leaching or percolation (Henao et al., 2009).

There are research works where plant extracts are used for the management of phytopathogens. There are those that have been done for; inhibition of Phytophthora infestans (Gamboa-Alvarado et al., 2003), Pythium control (Lira-Saldívar et al., 2003; Osorio et al., 2010), Verticillium dahliae control (López-Benítez et al., 2005) , Sclerotinia sclerotiorum (Al-Reza et al., 2010), Fusarium oxysporum (Rodríguez et al., 2012; Cáceres Rueda de León et al., 2013; Vásquez et al., 2014; Dania et al., 2014; Ferdes et al., 2017), control of Fusarium solani (Zaker, 2014; Vásquez et al., 2014) and Rhizoctonia solani (López-Benítez et al., 2005; Jasso de Rodríguez et al., 2007; Zamora-Natera et al., 2008; Dania et al., 2014) .

The effect of plant extracts on some pathogens, whether of medical or agricultural interest, is due to the fact that they contain secondary metabolites with a fungicidal and/or bactericidal effect, including phenolic compounds, coumarins, flavonoids, tannins, quinones, among others. There are works where the effect of plants on various pathogens is evaluated; for example, the effect of the extracts of: Moringa oleífera (Canett-Romero et al., 2014), Equisetum hymale (De Queiroz et al., 2015), Larrea tridentata (Bañuelos-Valenzuela et al., 2018), Peumus boldus (Mazutti et al., 2008) and Rosmarinus officinalis (Rozman and Jersek, 2009).

Therefore, the objective of this work was to evaluate in vitro, the effect of nine methanolic extracts on the phytopathogens, Fusarium oxysporum, F. solani and Rhizoctonia solani. With the hypothesis that plant extracts are capable of controlling and inhibiting the growth of some phytopathogenic microorganisms.

 MATERIAL AND METHODS

The study was carried out at the the Superior Technological Institute of Rioverde (ITSR) facilities, located on the Rioverde-San Ciro de Acosta Highway, Km. 4.5, Col. María del Rosario, Rioverde, San Luis Potosí, Mexico. For the present study, extracts from nine recognized plants were used; which were Moringa oleifera (Moringa, leaves), Persea americana (Avocado, leaves), Equisetum hymale (Horsetail, sprouts), Larrea tridentata (Gobernadora, leaves), Gnaphalium semiamplexicaule (Gordolobo, sprouts), Peumus boldus (Boldo, sprouts), Brickellia squarrosa (Prodigiosa, sprouts), Rosmarinus officinalis (Rosemary, sprouts) and Physalis coztomatl (Costomate, roots).

The extracts at 10% w/V (weight/volume) were obtained with the Soxhlet equipment (Cornig-Pyrex Model 3840-XL®), for five cycles using methanol (Merck®) as a stripping solvent. The extracts were packed in amber glass bottles and they were stored at 4 °C; Soxhlet extraction was done eight days before the boxes were prepared (Gamboa-Alvarado et al., 2003).

The phytopathogenic fungi used in this work were Fusarium oxysporum, F. solani and Rhizoctonia solani. These microorganisms were isolated from local cultures of Tomato (Solanum lycopersicum), and identified by molecular techniques. DNA extraction was done following the protocol described by Reader and Broda (1989). The sequence of the internal region of the 18S Rdna transcript was amplified, using the universal oligos ITS1 (5´TCC GTA GGT GAA CCT GCG G 3´) and ITS4 (5´TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 3´), designed by White et al., (1990). The PCR products were cloned into the pGEM-Teasy vector, following the manufacturer's instructions (Promega 2015); were sequenced by the Sanger method in the National Laboratory of Agricultural, Medical and Environmental Biotechnology of the Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica A.C. Once, ITS were sequenced, they were analyzed with BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) (Morgulis et al., 2008) at the NCBI (National Center for Biotechnology Information) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/.

<bold> <italic>In vitro</italic> evaluation of plant extracts against phytopathogens</bold>

The extract effect evaluation (25 ppm) was made by means of the poisoned culture method (Grover, 1962; Gamboa-Alvarado et al., 2003). This technique consists of incorporating the plant extract in Potato Dextrose Agar culture medium (PDA BD Bioxon® México) and measuring the mycelial growth of the phytopathogens F. solani, F. oxysporum and R. solani. The treatments of moringa, gobernadora, avocado, horsetail, boldo, gordolobo, prodigiosa, rosemary and costomate extracts were evaluated by placing 500 µL (25ppm) of the extracts per Petri dish (20 mL). Agar without any extract (only PDA) was included as a control. Each of the extracts was evaluated in triplicate against each of the phytopathogens (R. solani, F. solani and F. oxysporum), measuring mycelial growth every 24 h with a precision digital vernier +/-. 001", +/-.02 mm (Mitutoyo; 500-196-30C®). To cultivate the microorganisms, PDA medium was used, 39 g per liter of sterile distilled water. 20 mL of a PDA: ME (Potato Dextrose Agar: Methanolic Extract) mixture were poured into Petri dishes of 90 mm diameter, in a ratio of 1: 0.05; that is, 500 µL of extract per box. All of the above in a laminar flow hood (Brand LABCONCO® LABCO07283). After this time, the boxes were inoculated with a PDA 5 mm diameter explant, with growth of the phytopathogen and they were incubated in a bioclimatic chamber at 25 °C (Thermo Scientific® Mod 3949 brand). All tests were done in triplicate in a completely randomized experimental design.

Data analysis

With the data obtained in the experimental phase, the percentage of mycelial growth inhibition was calculated with the following formula:

I.C.M.=[(Dc−Dt)/Dc]𝑥100

where: I.C.M. is the percentage of mycelial growth inhibition, Dc is the diameter of the mycelium in the control and Dt = diameter of the mycelium in the treatment. Likewise, the analysis of variance (ANDEVA) and the Tukey multiple mean comparison (p ≤ 0.05) were performed. The analysis was done with the statistical software Minitab 16® Mexico.

RESULTS AND DISCUSSION

When evaluating the effect of Methanolic Extracts (ME) on Fusarium oxysporum, a statistical difference was observed between the treatments (p ≤ 0.05). The ME of L. tridentata inhibited 100% the growth of the pathogen for up to 144 h, and 90% for up to 240 h; while that of R. officinalis inhibited 50.7% up to 72 h, and 42.2% for 144 h (Table 1). López-Benítez et al., in 2005, presented similar results. They indicate that the extracts of Syzygium aromaticum and L. tridentata at 10% inhibit F. oxysporum f sp, Lycopersici growth, up to 144 h. Dania et al., in 2014, documented that the aqueous extracts (AE) of Oryza sativa and Quercus phillyraeoides at 1.5 and 2.5% can totally inhibit in vitro the growth of six phytopathogens, among them F. oxysporum.

Inhibition of mycelial growth (ICM, %) of <italic>Fusarium oxysporum</italic> with different methanolic extracts at 72, 144 and 240 h, after experiment start
Plant extract 72h 144 h 240 h
L. tridentata 100.0 ± 0.0 a 100.0 ± 0.0 a 89.4 ± 0.3 a
B. squarrosa 39.8 ± 4.4bc 38.6 ± 2.3 bc 31.7 ± 2.7 b
G. semiamplexicaule 24.6 ± 2.3 cd 28.3 ± 1.2 cd 24.2 ± 2.4 bc
P. americana 25.1 ± 5.4 cd 26.3 ± 2.2 d 12.9 ± 4.9 cd
P. boldus 26.0 ± 3.9 cd 24.5 ± 4.1 d 11.7 ± 2.7 cd
P. coztomatl 24.8 ± 4.2cd 27.4 ± 1.5c 9.2 ± 4.0 bc
M. oleifera 19.7 ± 3.4 d 17.1 ± 2.9 d 4.0 ± 1.4 d
R. officinalis 50.7 ± 2.9 b 42.2 ± 1.5 b 29.6 ± 2.2 b

Means with different letters indicate statistical difference (Tukey, p ≤ 0.05).

On the other hand, the ethanolic extracts (EE) of Fluorensia cernua (Leavesén), F. microphylla and F. retinophylla were shown to be an effective alternative for the control of Fusarium oxysporum, inhibiting its growth by 100 %, with a concentration of 1500 µL L-1 (Jasso de Rodríguez et al., 2007) .

There are studies where Essential Oils (EO) have also been evaluated for the management of F. oxysporum. There is the work of Ferdes et al., in 2017, with AE of R. officinalis, at a concentration of 20-µg mL-1 93% of the F. oxysporum growth is inhibited; while with 10-µg mL-1 of the AE of P. anisum and S. hortensis the growth of F. oxysporum is totally inhibited. Likewise, Vásquez et al., in 2014, concluded that the EOs of Chenopodium ambrosioides at 2% and Chenopodium album at 0.03% completely inhibit the growth of F. oxysporum f. sp. Lycopersici, up to 11 days.

In this study, the ME of L. tridentata inhibited F. oxysporum growth, up to 144 h, followed in effectiveness by that of R. officinalis and B. squarrosa. With these treatments, mycelial growth is inhibited up to 80%, compared to the negative control (Table 2). These results coincide with those reported by Osorio et al., in 2010, they conclude that with a concentration of 0.7 mg kg-1 L. tridentata inhibits 100% F. oxisporum growth in vitro. In the results of the extracts on Fusarium solani, by means of the ANDEVA and the comparison of Tukey means (p≤0.05), a statistically significant difference was observed between treatments. The ME of L. tridentata inhibited 100% of F. solani growth, up to ten days; showing an important inhibitory effect on this phytopathogen. The foregoing is relevant if it is considered that there are chemical products that are applied one or more times a week and do not achieve these results. Even under laboratory conditions, they cannot inhibit the mycelium growth 100%, as reported by Yossen and Conles in 2016, which in their work with commercial molecules reached an inhibition of 60 to 97%. The R. officinalis ME evaluated in this work inhibited mycelium growth by 70%, compared to the control for up to 144 h. This data is similar to that obtained with aqueous extracts of Prosopis juliflora and Lantana camara, which achieve 80 and 69% mycelial inhibition, respectively (Seetha et al., 2010). Likewise, studies by David et al., in 2013, report that the ME of flower buds of Calotropis gigantea at 25% reduces F. solani growth by 68%.

Average mycelial growth (mm) of <italic>Fusarium oxysporum</italic> with different methanolic extracts at 72, 144 and 240 h, after experiment start
Plant extract 72 h 144 h 240 h
Agar 22.3 ± 0.4 a 44.4 ± 0.7 a 65.9 ± 0.7 a
L. tridentata 0.0 ± 0.0 e 0.0 ± 0.0 e 7.0 ± 0.2 e
B. squarrosa 13.4 ± 1.0 cd 27.3 ± 1.0 cd 45.0 ± 1.7 d
R. officinalis 11.0 ± 0.6 d 25.7 ± 0.6 d 46.4 ± 1.4 d
G. semiamplexicaule 16.8 ± 0.5 bc 31.8 ± 0.5 bc 50.0 ± 1.6 cd
P. coztomatl 16.8 ± 0.9 bc 32.3 ± 0.7 bc 53.3 ± 2.6 cd
E. hymale 18.2 ± 0.1 b 35.4 ± 1.5 b 56.7 ± 1.7 bc
P. americana 16.7 ± 1.2 bc 32.7 ± 1.0 b 57.5 ± 3.2 abc
P. boldus 16.5 ± 0.9 bc 33.5 ± 1.8 b 58.3 ± 1.8 abc
M. oleifera 17.9 ± 0.8 b 36.8 ± 1.3 b 63.3 ± 0.9 ab

Means with different letters indicate statistical difference (Tukey, p ≤ 0.05)

Inhibition of mycelial growth (ICM, %) of <italic>Fusarium solani</italic> with different methanolic extracts at 72, 144 and 240 h, after the experiment start
Plant extract 72 h 44 h 240 h
L. tridentata 100.0 ± 0.0a 100.0 ± 0.0 a 100.0 ± 0.0 a
R. officinalis 64.7 ± 0.9 b 70.2 ± 0.3 b 58.5 ± 1.7 b
B. squarrosa 37.9 ± 0.4 c 37.2 ± 1.3 c 11.8 ± 0.9 c
P. coztomatl 26.5 ± 1.2 de 28.5 ± 1.8 d 5.7 ± 0.4 d
P. americana 26.9 ± 2.5 de 28.4 ± 1.2 d 0.5 ± 0.5 e
P. boldus 31.2 ± 1.2 cd 30.8 ± 0.3 d 0.0 ± 0.0 e
G. semiamplexicaule 26.3 ± 2.0 de 28.1 ± 0.3 d 0.0 ± 0.0 e
M. oleifera 22.6 ± 3.4 de 15.5 ± 0.9 f 0.0 ± 0.0 e
E. hymale 21.5 ± 2.4 e 22.2 ± 0.6 e 0.0 ± 0.0 e

Means with different letters indicate statistical difference (Tukey, p ≤ 0.05)

It is important to have ecological options for phytopathogenic fungi control, such as those explored in this work. In this research, the results with the ME of L. tridentata coincided with those of Osorio et al., in 2010, who used L. tridentata polyphenolic extracts, and managed to inhibit 100% of F. solani growth, with a concentration of 0.70 mg L-1. In a study conducted by Vásquez et al., (2014), the fungistatic effect of aqueous extracts (AE) and essential oils (EO) of species of Chenopodium genus on F. solani was evaluated. The authors concluded that the EO of Chenopodium ambrosioides at 2% and Chenopodium album at 0.03% completely inhibit F. solani growth of, up to 11 days; while in this work L. tridentata inhibited it 100% for up to 10 days. Another case with similar results on Fusarium spp. was the work of Duarte et al., en el 2013, who with essential oils from Piper aduncum subsp. ossanum and Piper aurintum totally inhibit the growth of this fungus.

On the other hand, Zaker (2014) concluded that the ME of Artemisia annua leaves at 15%, is capable of inhibiting F. solani growth; while in the present work in ME of L. tridentata it inhibited F. solani growth to 100%, followed by R. officinalis extracts and B. squarrosa; which, although to a lesser extent, also inhibit it (Table 4).

Average mycelial growth (mm) of <italic>Fusarium solani</italic>, with different methanolic extracts at 72, 144 and 240 h, after the experiment start
Plant extract 72 h 144 h 240 h
Agar 30.1 ± 0.4 a 66.6 ± 0.7 a 80.0 ± 0.0 a
L. tridentata 0.0 ± 0.0 f 0.0 ± 0.0 g 0.0 ± 0.0 e
R. officinalis 10.6 ± 0.3 e 19.8 ± 0.2 f 33.2 ± 1.3 d
B. squarrosa 18.7 ± 0.1 d 41.9 ± 0.9 e 70.5 ± 0.8 c
P. coztomatl 22.1 ± 0.3 bc 47.6 ± 1.2 d 75.5 ± 0.3 b
P. americana 22.0 ± 0.8 bc 47.7 ± 0.8 d 79.6 ± 0.4 a
P. boldus 20.7 ± 0.4 cd 46.1 ± 0.2 d 80.0 ± 0.0 a
G. semiamplexicaule 22.2 ± 0.6 bc 47.9 ± 0.2 d 80.0 ± 0.0 a
M. oleifera 23.3 ± 1.0 bc 56.3 ± 0.6 b 80.0 ± 0.0 a
E. hymale 23.7 ± 0.7 b 51.8 ± 0.4 c 80.0 ± 0.0 a

Means with different letters indicate statistical difference (Tukey, p ≤ 0.05)

L. tridentata methanolic extract (ME), inhibits up to 100% of Rhizoctonia solani growth, during the first ten days. The above indicates that this extract is an effective fungistatic. With the ANDEVA and the comparison of Tukey means with a significance of 95%, a significant statistical difference was observed between treatments, since in addition to L. tridentata, the ME of R. officinalis also presents a remarkable inhibition percentage, causes a fungistatic effect 56 and 48% at 144 h and 240 h, respectively (Table 5).

Inhibition of mycelial growth (ICM, %) in time of <italic>Rhizoctonia solani</italic> with different methanolic extracts at 72, 144 and 240 h, after experiment start
Plant extract 72 h 44 h 240 h
L. tridentata 100.0 ± 0.0a 100.0 ± 0.0 a 100.0 ± 0.0 a
R. officinalis 56.8 ± 0.9 b 56.2 ± 1.9 b 48.0 ± 3.0 b
B. squarrosa 32.7 ± 1.7 c 23.2 ± 2.2 c 17.8 ± 2.2 c
P. americana 24.5 ± 1.6 c 19.1 ± 1.2 cd 8.1 ± 1.3 d
P. coztomatl 26.9 ± 3.9 c 21.6 ± 1.4 cd 7.5 ± 1.1 d
P. boldus 28.7 ± 2.2 c 21.3 ± 1.1 cd 7.5 ± 2.3 d
E. hymale 25.9 ± 1.9 c 18.5 ± 0.2 cd 2.7 ± 0.9 d
M. oleifera 24.4 ± 3.1 c 17.0 ± 3.9 cd 1.8 ± 0.9 d
G. semiamplexicaule 23.8 ± 0.7 c 14.1 ± 1.3 d 1.1 ± 0.5 d

Means with different letters indicate statistical difference (Tukey, p ≤ 0.05

Controlling phytopathogenic fungi growth with plant extracts represents a great advance in plant protection. In the case of Rhizoctonia solani; Gamboa-Alvarado et al., in 2003 reported results similar to those obtained in this research work; found that the ME of Fluorensia cernua (Hojasén) at a concentration of 20,000 mg L-1, inhibits 85% the growth of this fungus for up to 96 hours, compared to the control. López-Benítez et al., in 2005, with aqueous extracts of L. tridentata and Cinnamomum zeylanicum at 10%; of Syzygium aromaticum at 5%, were able to inhibit growth in vitro for up to 144 h, and with the aqueous extract of Quercus phillyraeoides at 3.5% they inhibited the growth of the phytopathogen by 94%. Similarly, the alkaloid extract of Lupinus mexicanus against R. solani in a concentration of 5 mg mL-1 inhibits its growth 100% (Zamora-Natera et al., 2008). Jasso de Rodríguez et al., (2007) mention that the ethanolic extracts of Flourensia cernua and F. retinophylla at a concentration of 1000 µL L-1 inhibit their growth. Similarly, Al-Reza et al., en el 2010, determined that the EO of Cestrum nocturnum has a high fungistatic power capable of inhibiting the growth of R. solani up to 80%. Also Touba et al., in 2012, found that Kaempferia galanga AE could totally inhibit it. On the other hand, Dania et al., in 2014 demonstrated that the 1% aqueous extract of Oryza sativa Husk, in vitro, totally inhibits the growth of this phytopathogen.

Average mycelial growth (mm) of <italic>Rhizoctonia solani</italic>, with different methanolic extracts at 72, 144 and 240 h, after experiment start
Plant extract 72 h 44 h 240 h
Agar 19.9 ± 0.2 a 45.8 ± 0.2 a 80.0 ± 0.0 a
L. tridentata 0.0 ± 0.0 d 0.0 ± 0.0 e 0.0 ± 0.0 e
R. officinalis 9.6 ± 0.2 c 19.5 ± 0.8 d 34.3 ± 2.0 d
B. squarrosa 15 ± 0.4 b 34.1 ± 1.0 c 54.2 ± 1.5 c
E. hymale 16.5 ± 0.4 b 36.2 ± 0.1 bc 64.2 ± 0.6 b
G. semiamplexicaule 17 ± 0.1 b 38.1 ± 0.6 b 65.2 ± 0.3 b
M. oleifera 16.9 ± 0.7 b 36.9 ± 1.7 bc 64.7 ± 0.6 b
P. americana 16.8 ± 0.3 b 35.9 ± 0.5 bc 60.6 ± 0.9 b
P. boldus 15.9 ± 0.5 b 34.9 ± 0.5 bc 61.0 ± 1.5 b
P. coztomatl 16.3 ± 0.9 b 34.8 ± 0.6 bc 61.0 ± 0.7 b

Means with different letters indicate statistical difference (Tukey, p ≤ 0.05)

 CONCLUSION

The methanolic extract of gobernadora (Larrea tridentata), is effective to inhibit the growth of Fusarium oxysporum, Fusarium solani and Rhizoctonia solani, up to ten days. Similarly, it is concluded that the methanolic extract of Rosamarinus officinalis (Rosemary) can be used for the management of Fusarium oxysporum, Fusarium solani and Rhizoctonia solani, with less effectiveness than that of Larrea tridentate.